LAMPIRAN Lampiran 1. Bagan rancangan penelitian r
r
Pengambilan sampel
Tahap I (Penetan kandungangula pereduksi)
Pengolahan sampel
Tahap II (Penetapan kandungan substrat optimal)
Kandimgan substrat 25%, 50%, 75% dan 100% (w/v)
Tahap III | (Penetan Berat starter optimal)
Berat starter 15,25, 35, 45 dan 55 gram
TahapIV (Menentukan waktu fermentasi optimal untuk asam asetat)
Variabel waktu fermentasi 3,4, 5, 6, 7, 8,9,10, dan 11 hari
Kandungan substrat optimal
Kandungan alkohol
Kandungan alkohol
Kandungan asam asetat
r
Berat starter optimal
Waktu fermentasi optimal
Lampiran 2. Pembuatan larutan 1. Larutan reagen Nelson-Somogyi - Reagen A : 1,5 gram K-Na-Tartarat, 3 g NaaCOa anhidrat, 18 g Na2S04 anhidrat dilarutkan ke dalam 100 ml akuades dengan pemanasan. - Reagen B : 1 gram
CUSO4.5H2O
dan 9 g Na2S04 anhidrat ke dalam 50 ml akuades,
diaduk hingga semuanya larut dan diteteskan 1-2 tetes H2SO4 pekat. - Reagen Nelson-somogyi: Larutan reagen A dan Reagen B dicampurkan dengan perbandingan 4:1. 2. Larutan arseno molibdat 12,50 g ammonium molibdat tetrahidrat dilarutkan dalam 200 ml akuades. 10,5 ml H2SO4 pekat dan 1,5 g disodium hidrogen arsenat dilarutkan dalam 12,5
ml akuades. Larutan ini dituangkan ke dalam larutan molibdat, lalu diencerkan hingga 250 ml. Setelah bercampur baik, larutan ini dituangkan ke dalam botol coklat yang telah dibimgkus dengan aluminium foil (larutan tidak boleh terkena sixm tampak). Jika ada inkubator, larutan ini diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam sampai 48 jam. Bila tidak ada inkubator, disimpan pada suhu kamar sampai 72 jam. Setelah itu, larutan ini disimpan ke dalam lemari es tanpa memindahkaimya dari dari botol coklat. Dalam keadaan ini arsenomolibdat dapat disimpan untuk waktu yang lama. 3. Indikator fenol ftalein (pp) Sebanyak 0,5 gram bubuk fenol ftalein dilarutkan dengan 50 mL alkohol (etanol). Kemudian ditambahkan 50 mL aquades dan aduk sampai homogen, kemudian simpandalam botol dan beri label.
35
Lampiran 3. Kurva Icestabilan wama penentuan gula pereduksi 0.14 0.12 0.1
1
i i
i j
I 0.08
\
i 1
0.06 0.04 0.02 0
U
'
1 1
1i
]
' i ij
1 j
1
i
I
1
j
i
M
j
j
1
;
! i i 1 ! i i ':
\
]
i
!
1i
I • 20
40 60 waktu (menit)
80
100
.
J t
Lampiran 4. Kurva panjang gelombang optimum penentuan gula pereduksi
580 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800 820 840 860 880 900 Panjang gelombang
Lampiran 5. Kurva standar penentuan gula pereduksi
36
Lampiran 6. Contoh perhitungan kandungan gula pereduksi Absorban sampel = 0,42 (Limbah daging nenas) Persamaan linier y = 0,022x y = 0,022x 0,42 = 0,022x X
= 0,42 0,022
X = 19,0909 ppm (kandungan yang terukur) X = 19,0909 ppm x 4000 (pengenceran) X = 76363,64 ppm Lampiran 7. Hasil penetapan asam asetat dengan metode titrimetri Lama fermentasi
Volume titrimetri
Kandungan (fp 250x) %
1
2
3
4
Rata-rata
3
0,3
0,4
0,35
0,35
0,35
2,48
4
0,45
0,35
0,45
0,35
0,4
2,83
5
0,5
0,6
0,5
0,6
0,55
3,89
6
0,6
0,5
0,6
0,6
0,575
4,07
7
0,6
0,5
0,55
0,6
0,55
3,89
8
0,55
0,55
0,5
0,6
0,55
3,89
9
0,6
0,6
o;6
0,6
0,6
4,248
10
0,6
0,6
0,6
0,6
0,6
4,248
11
0,6
0,6
0,6
0,6
0,6
4,248
Contoh perhitimgan: Kandungan NaOH
= 0,0944 N
Volume sampel
==10mL
Faktor pengenceran
= 250
Volume NaOH titrimetri =0,6mL Kandungan asam adalah : Vsampel. Nsampel
~ VNaOH.NNaOH
lOmL.Nsampei = 0,6mL. 0,0944 N Nsampel
37
= 0,1416 N (tcrukur)
Berat asam total terukur = 0,1416 x 10 x 60 = 84,69 mg Kadar asam total dalam sampel = (0,08469 gram x 250) x 100% 500 gram sampel = 4,248%
Lampiran 8. Kurva standar pengukuran asam asetat dengan metode HPLC 4500000
_y = 4680822,384x - 449336,732^
4000000 3500000 3000000 £
2500000
g
2000000
2:
1500000 1000000 500000 0 0.00%
0.20%
0.40%
0.60%
0.80%
1.00%
1.20%
Konsentrasi standar
Lampiran 9. Contoh perhitungan penetapan kandungan asam asetat dengan metode HPLC Persamaan linier : y =4680822,3684x-449336,7315 Luas area = 1527731 y = 4680822,3684x - 449336,7315 1527731 = 4680822,3684x - 449336,7315 x = 1527731 +449336,7315 4680822,3684 x = 0,42238 % X 10 (faktor pengenceran) x = 4,2238 %
Lampiran 10. Contoii kromatogram Uji kesesuaian sistim HPLC
6/16Q01010;52;451 /1
Admin pangan Llmt>ah Nenas 20 uL UKSeicd PK.As.Asetat.lcm
Acquired by Sample Name Sample ID Injection Volume Data File Name Method File Name Batch File Name Report File Name Data Acquired Data Processed
Default Icr 6/11/2010 2:17:36 PM 6/11/2010 2:24:41 PM
C \Ui>SoluHom\[M«li>n)iKl1\ta*m I M M vwndryUKS fi.lcd
mV
i
1«
100
80^
mm
ttWAChl/JMnm
PeakTable Detector A Chi 214nm Ret. Time Peak# 3.079 1 1 3.465 2
3 4 Total\
3.852 S.366
Area 20471 8860 2190182 21160 2240673
Height 1459 705 169792 1168 173125
Name
C:\LabSolutlons\Data\Project1\Asam asetat wendry\UKS 6.lcd
Lampiran I L Contoh kromatogram pengukuran standar asam asetat 6/16/2010 10:47:38 1 /1
Acquired by Sampte Name Sample ID Injection Volume Data File Name Method File Name Batch File Name Report File Name Data Acquired Data Processed
Admin pangan Limbah Nenas 20 uL baku 0 8%.lcd PKAsAsetatlcm Default Icr 6/11/2010 12:35:04 PM 6/11/2010 12:57:39 PM
CALabSolutii>nsVData\Proiecl1\Asam asetal wendry\bal
lc<j DMA CM
200
150
100
S •a 00
25
50
75
10.0
125
15.0
175
20.0
1Cl«*Chl/2l*»n
PeakTable Elector A Chi 2l4nm Peak# Ret. Time 3.064 1 3.248 2
3 4 5 Total
3.614 3.835 5.355
Area 32007 27509
Height 2261 1839
14321 3387618
1633 223505
34635 3496090
1616^ 230854
Name j
C:U.abSolutions\Data\Proiect1\Asam asetat wendry\baku 0 8% ted
40
