UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI MINYAK ATSIRI KULIT BUAH JERUK KEPROK (Citrus nobilis Lour)TERHADAP Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli SKRIPSI
Oleh : NANANG FERIYANTO K 100 050 170
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMADIYAH SURAKARTA SURAKARTA 2009
BAB 1 PENDAHULUAN A. Latar Belakang Infeksi merupakan penyakit yang dapat ditularkan dari satu orang ke orang lain atau dari hewan ke manusia. Infeksi disebabkan oleh berbagai mikroorganisme seperti virus, bakteri, riketsia, jamur, protozoa. Organismeorganisme ini dapat menyerang seluruh tubuh atau sebagian daripadanya. Salah satu infeksi dapat disebabkan oleh bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus (Gibson, 1996). Infeksi yang disebabkan oleh Escherichia coli dan Staphylococcus aureus akan berbahaya jika tidak ditangani secara baik, sehingga diperlukan pengobatan khusus salah satunya dengan obat tradisional. Obat tradisional adalah obat yang dibuat dari bahan atau paduan bahan-bahan yang diperoleh dari tanaman, hewan atau mineral yang belum ber upa zat murni. Obat tradisional meliputi simplisia, jamu, dan obat kelompok fitoterapi (Agoes dan Jacob, 1992). Obat tradisional yang digunakan sebaiknya memenuhi kriteria mudah didapat, dikenal banyak orang, proses penyimpanan sederhana, mudah digunakan, dan tidak berbahaya (Agoes dan Jacob, 1992). Pemakaian tanaman obat dalam dekade terakhir ini cenderung meningkat sejalan denga n berkembangnya industri jamu/obat tradisional, farmasi, kosmetik, makanan, minuman. Tanaman obat yang diperkenankan biasanya da lam bentuk simplisia. Bahan yang telah dikeringkan dan belum mengalami pengolahan 1
2
apapun. Simplisia tersebut berasal dari akar, daun, bunga, biji, buah, terna dan kulit batang (Syukur dkk, 2001). Minyak esensial yang tersusun dari molekul-molekul aromatik alami dilengkapi dengan begitu banyak sifat fisiologis dan farmakologis sehingga minyak esensial dapat dimanfaatkan oleh hampir semua bidang kedokteran, yang bukan hanya dari segi kuratif tetapi juga preventif. Efek karminatif dan plasmolitik serta antiseptik dimiliki oleh beberapa minyak esensial (Price dan Price, 1997). Minyak atsiri sebagian besar dapat menghambat pertumbuhan bakteri salah satunya Staphylococcus aureus. Staphylococcus aureus bertanggung jawab atas setengah kasus sepsis pada luka bedah; pada unit kebidanan: abses payudara pada ibu-ibu, mata lengket dan lesi-lesi kulit pada bayi; ratusan kematian setiap tahun di Inggris karena infeksi Staphylococcus aureus yang terjadi di rumah sakit (Gibson, 1996). Escherichia coli merupakan flora normal di dalam intestin. Escherichia coli dapat menyebabkan infeksi saluran kencing yang merupakan infeksi terbanyak (80%); gastroenteritis dan meningitis pada bayi, peritonitis, infeksi luka, kolesistitis, syok bakteremia karena masuknya organisme ke dalam darah dari uretra, kateterisasi atau sistoskopi atau dari daerah sepsis pada abdomen atau pelvis (Gibson, 1996). Salah satu tanaman yang mengandung minyak esensial adalah jeruk keprok (Citrus nobilis Lour), Berdasarkan uraian tersebut maka penelitian ini
3
dilakukan untuk mengetahui apakah minyak atsiri kulit buah jeruk keprok (Citrus nobilis Lour.) memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
B. Perumusan Masalah Berdasarkan latar belakang dapat dirumuskan permasalahan yaitu: 1. Apakah min yak atsiri kulit buah jeruk keprok (Citrus nobilis Lour) memiliki aktivitas antibakteri terhadap S. aureus dan E. coli dan berapa nilai kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM)? 2. Komponen minyak atsiri apa yang mempunyai aktivitas antibakteri terhadap S. aureus dan E. coli
C. Tujuan Penelitian 1. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas minyak atsiri kulit buah jeruk keprok (Citrus nobilis Lour) terhadap S. aureus dan E. coli. 2. Untuk mengetahui kandungan minyak atsiri yang mempunyai aktivitas antibakteri terhadap S. aureus dan E. Coli? D. Tinjauan Pustaka 1. Tanaman Jeruk Keprok (Citrus nobilis Lour) a. Klasifikasi Divisi
: Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae Kelas
: Dicotyledoneae
Bangsa
: Geraniales
4
Suku
: Rutaceae
Marga
: Citrus
Jenis
: Citrus nobilis Lour
(Van Steenis, 1975)
Nama Daerah Sumatera : jeruk jepun. Jawa
: jeruk keprok (Sunda), jeruk keprok (Jawa), jeruk keprok (Madura).
b.Morfologi Tumbuhan jeruk keprok merupakan jenis pohon dengan tinggi 2-8 meter. Tangkai daun bersayap sangat sempit sampai boleh dikatakan tidak bersayap, panjang 0,5-1,5 cm. Helaian daun berbentuk bulat telur memanjang, elliptis atau berbentuk lanset dengan ujung tumpul, melekuk ke da lam sedikit, tepinya bergerigi beringgit sangat lemah dengan panjang 3,5-8 cm. Bunganya mempunyai diameter 1,5-2,5 cm, berkelamin dua daun mahkotanya putih. Buahnya berbentuk bola tertekan dengan panjang 5-8 cm, tebal kulitnya 0,2-0,3 cm, dan daging buahnya berwarna oranye. Rantingnya tidak berduri dan tangkai daunnya selebar 1-1,5 mm (Van Steenis, 1975). c. Khasiat Daging buah jeruk keprok (Citrus nobilis Lour) berkhasiat membantu memulihkan tenaga dan membersihkan dahak. Biji-bijinya berkhasiat memulihkan tenaga dan menghentikan rasa sakit. Manfaat dan khasiat jeruk keprok mandarin (Citrus nobilis Laureiro) untuk terapi antara lain untuk pertahanan tubuh, antikanker, memerangi infeksi virus, menurunkan kadar kolesterol, dapat menguatkan dan memberikan gizi pada paru, memperbaiki limpa, membantu menghentikan batuk dan mengeluarkan dahak (Hutapea, 1993).
5
d. Kandungan kimia Daun, akar, dan kulit buah Citrus nobilis mengandung alkaloid dan polisakarida dan kulit buahnya mengandung minyak atsiri (Hutapea, 1993). Kulit buah
jeruk
keprok
mempunyai
berbagai
macam
senyawa
diantaranya
tangeraxanthin, tangeritin, terpinen-4-ol, terpineolene, tetradecanal, threonine, thymol, thymyl-methyl-eter, trypthophan, tyrosine, cis-3-hexenol, cis-carveol, citric acid, citronellal, citronellic acid, citronellyl acecate, cystine, decanal, decanoic acid, decanol, nobiletin (Anonim, 2002). 2. Minyak Atsiri Minyak atsiri yang dikenal juga dengan nama minyak eteris atau minyak terbang (essential oil, volatile oil) dihasilkan oleh tanaman. Minyak tersebut mudah menguap pada suhu kamar tanpa mengalami dekomposisi, rasa getir (pungen taste), berbau wangi sesuai dengan bau tanaman penghasilnya, umumnya larut dalam pelarut organik dan tidak larut air (Ketaren, 1985). Minyak atsiri merupakan salah satu hasil sisa proses metabolisme dalam tanaman, yang terbentuk karena reaksi antara berbagai persenyawaan kimia dengan adanya air. Minyak tersebut disintes is oleh sel kelenjar (glandular cell) pada jaringan tanaman dan ada juga yang terbentuk dalam pemb uluh resin (resin duct) (Guenther, 1987). Minyak atsiri umumnya terdiri dari berbagai campuran persenyawaan kimia yang terbentuk dari unsur karbon (C), hidrogen (H), dan oksigen (O) serta beberapa persenyawaan kimia yang mengandung unsur nitrogen (N) dan belerang (S) (Ketaren, 1985).
6
Komponen minyak atsiri secara garis besar digolongkan menjadi empat yaitu: a. Terpenoid yang ada hubungannya dengan isopren b. Persenyawaan lurus tidak mengandung rantai cabang c. Turunan berzena d. Bermacam- macam persenyawaan lain, misalnya turunan alkohol (linalool, borneol, sineol, eugenol, feniletilalkohol), aldehid (keton benzaldehida, anisaldehida, sinamaldehida, sitral), keton (kamfor, methon, asetofenon, piperiton) (Guenther, 1987). Senyawa trans -2 heksenal (aldehida daun), yang sebagian besar menjadi penyebab bau khas daun bila diremas dilaporkan bertindak sebagai antibiotika, hormon luka, dan perangsang perkecambahan biji (Robinson, 1995). Umumnya variasi komposisi minyak atsiri disebabkan oleh perbedaan jenis tanaman penghasil, kondisi iklim, tanah tempat tumbuh, umur panenan, metode ekstraksi yang dipergunakan, dan cara penyimpanan minyak (Guenther, 1987). 1) Ekstraksi minyak atsiri Minyak atsiri adalah zat cair yang mudah menguap bercampur dengan persenyawaan padat yang berbeda dalam hal komposisi dan titik cairnya, larut dalam pelarut organik dan tidak larut air. Berdasar sifat tersebut, maka minyak atsiri dapat didestilasi dengan 4 macam cara yaitu penyulingan (destillation), pengepresan (expression), ekstraksi dengan pelarut menguap (solvent extraction), dan absorbsi oleh lemak padat (enflourasi atau maserasi) (Ketaren, 1985).
7
Penyulingan adalah proses pemisahan komponen yang berupa cairan atau padatan dari dua macam campuran atau lebih berdasarkan perbedaan titik uapnya dan proses ini dilakukan terhadap minyak atsiri yang tidak larut dalam air. Dalam industri minyak atsiri dikenal tiga macam sistem penyulingan, yaitu a. Penyulingan dengan air Pada sistem penyulingan dengan air, bahan yang akan disuling langsung kontak dengan air mendidih. Keuntungannya adalah baik untuk menyuling bahan berbentuk tepung dan bunga-bunga yang mudah menggumpal jika kena panas. Kelemahannya adalah pengekstraksian minyak atsiri berlangsung lama (Ketaren, 1985). b. Penyulingan dengan uap dan air Pada sistem penyulingan ini, bahan diletakkan di atas piring yang berupa ayakan yang terletak beberapa sentimeter di atas permukaan air dalam ketel penyuling. Keuntungan menggunakan sistem tersebut adalah karena uap berpenetrasi secara merata ke dalam jaringan bahan dan suhu dapat dipertahankan sampai 100?C. Lama penyulingan relatif singkat, rendemen minyak lebih besar dan mutunya lebih baik jika dibandingkan dengan minyak hasil penyulingan dengan sistem penyulingan dengan air, dan bahan yang disuling tidak dapat menjadi gosong (Ketaren, 1985). c. Penyulingan dengan Uap. Sistem penyulingan ini baik digunakan untuk mendestilasi minyak dari biji-bijian, akar dan kayu-kayuan yang umumnya mengandung komponen minyak yang bertitik didih tinggi. Sistem penyulingan ini tidak baik dilakukan terhadap
8
bahan yang mengandung minyak atsiri yang mudah rusak oleh pemanasan dan air. Minyak yang dihasilkan dari penyulingan, baunya akan sedikit berubah dari bau asli alamiah, terutama minyak atsiri yang berasal dari bunga (Ketaren, 1985). 3. Klasifikasi Staphylococcus aureus Dunia : Protophyta Divisi : Protozoa Kelas : Schizomycetes Bangsa : Eubacteriates Suku : Micrococcaceae Marga : Staphylococcus Jenis
: S. aureus (Salle,1961) S. aureus berbentuk sferis, bila menggerombol dalam susunan yang tid ak
teratur, mungkin sisinya agak rata karena tertekan. Diameter kuman antara 0,8 – 1,0 mikron (Anonim, 1994) S. aureus mudah tumbuh pada kebanyakan berkembang baik teriologik dalam keadaan aerobik atau mikro aerobik. S. aureus tumbuh paling cepat pada suhu 37?C tetapi paling baik membentuk pigmen pada suhu kamar (20 ?C). Koloni berbentuk bulan, lurus menonjol dan berkilau-kilauan me mbentuk berbagai pigmen (Jawetz et al., 1991). S. aureus mempunyai warna khas kuning keemasan, hanya intensitas warnanya dapat bervariasi (Anonim, 1994). 4. Bakteri Escherichia coli a)
Klasifikasi Bakteri Escherichia coli
9
Divisi
: Proteabacteria
Kelas
: Gammaprotea Bacteria
Ordo
: Enterobacteriales
Genus
: Escherichia
Spesies : Escherichia coli (Anonim, 1993) b) Morfologi Bakteri E. coli. E. coli adalah bakteri Gram negatif, berbentuk batang pendek, berderet seperti rantai dan dapat memfermentasikan glukosa dan laktosa membentuk asam dan gas (Pelczar dan Chan, 1988). c) Identifikasi Bakteri E .coli. E. coli yang diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37 0C pada media Mc. Conkey menghasilkan koloni berwarna merah, Hal ini menunjukkan bahwa bakteri E. coli dapat memfermentasi laktosa (Pelczar dan Chan, 1988). d) Sifat Bakteri E. coli. E. coli dapat tumbuh dengan baik pada media Mc. Conkey dan dapat memecah laktosa dengan cepat, juga dapat tumbuh pada media agar darah dapat merombak karbohidrat dan asam lemak menjadi asam dan gas serta dapat menghasilkan gas karbondioksida dan hidrogen (Pelczar dan Chan, 1988). 5. Media Media adalah kumpulan zat- zat anorganik maupun organik yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri dengan cara tertentu dalam pemeriksaan
10
laboratorium mikrobiologi. Penggunaan media ini sangat penting yaitu untuk isolasi identifikasi maupun diferensiasi (Anonim, 1987) Susunan dan kadar nutrien dalam suatu media harus seimbang untuk mendapatkan pertumbuhan bakteri yang optimal. Hal ini perlu diperhatikan karena banyak senyawa-senyawa yang menjadi penghambat atau menjadi racun bagi bakteri kalau kadarnya terlalu tinggi (misalnya garam-garam dari asam lemak gula dan lain- lain) (Anonim, 1987) Syarat-syarat media yang harus dipenuhi untuk mendapatkan suatu lingkungan yang cocok bagi pertumbuhan bakteri adalah: a. Susunan makanan dalam suatu media yang digunakan untuk pertumbuhan, harus ada air, sumber karbon, sumber nitrogen, mineral, vitamin dan gas. b. Tekanan osmose, ini berhubungan dengan pertumbuhan bakteri karena bakteri membutuhkan media yang isotonis, karena bila media tersebut hipotonis maka akan terjadi plasmolisis. c. Derajat keasaman (pH) sangat penting karena pada umumnya bakteri membutuhkan pH sekitar netral, namun ada bakteri tertentu yang membutuhkan pH sangat alkalis seperti vibrio, membutuhkan pH 8 – 10 untuk pertumbuhan yang optimal. d. Temperatur digunakan untuk mendapatkan pertumbuhan yang optimal, bakteri membutuhkan temperatur tertentu. Umumnya untuk bakteri yang patogen membutuhkan temperatur sekitar 37?C sesuai dengan temperatur tubuh. e. Sterilitas-sterilitas media merupakan suatu syarat yang sangat penting. Tidak mungkin melakukan pemeriksaan mikrobiologi apabila media yang digunakan
11
tidak steril. Untuk mendapatkan suatu media yang steril maka setiap tindakan serta alat-alat yang digunakan harus steril dan dikerjakan secara aseptik (Anonim, 1987). 6. Antibakteri Alasan utama untuk mengendalikan mikroorganisme adalah untuk mencegah penyakit dan infeksi, membasmi mikroorganisme pada inang yang terinfeksi, dan mencegah pembusukan bahan oleh mikroorganisme. Antibakteri adalah obat atau senyawa kimia yang digunakan untuk membasmi bakteri, khususnya bakteri yang bersifat merugikan manusia (Pelczar dan chan, 1988). Zat kemoterapi antimikroba dikatakan ideal bila zat antimikroba memiliki toksisitas yang selektif, yang berarti bahwa suatu obat berbahaya bagi parasit tetapi tidak membahayakan inang (Jawetz et al., 1996). Mekanisme kerja anti mikroba dapat dibagi menjadi empat cara yaitu: a. Penghambatan sintesis dinding sel b. Penghambatan fungsi selaput sel c. Penghambatan sintesis protein yaitu hambatan translasi dan transkripsi bahan genetik d. Penghambatan sintesis asam nukleat (Jawetz et al., 1996). Aktivitas antimikroba dipengaruhi oleh beberapa faktor antara lain: 1) Konsentrasi zat antimikroba 2) Jumlah mikroorganisme 3) Keasaman atau kebasaan (pH) 4) Potensi suatu zat anti mikroba dalam larutan yang diuji
12
5) Kepekaan suatu mikroba terhadap konse ntrasi anti jamur (Pelczar dan Chan, 1988). 7. Uji Aktivitas Antibakteri. Uji kepekaan bakteri dapat dilakukan dengan beberapa cara yaitu: a. Dilusi cair atau dilusi padat Pada prinsipnya zat antibakteri diencerkan hinggga diperoleh beberapa konsentrasi. Pada dilusi cair, masing- masing konsentrasi obat ditambah suspensi kuman dalam media, sedangkan pada dilusi padat tiap konsentrasi obat dicampur dengan media agar, lalu ditanami kuman (Anonim, 1993). Pada dilusi cair untuk melihat adanya pertumbuhan bakteri, cukup dilihat apakah media menjadi keruh atau tidak. Jika keruh berarti tumbuh bakteri tapi jika jernih maka berarti tidak tumbuh. Di dalam media cair dapat diketahui sifatsifat koloninya yang tampak. Permukaan medium dapat memperlihatkan bentuk serabut, cincin, langit-langit atau selaput (Anonim, 1993). Pada dilusi padat sifat koloni dapat dilihat dari bentuk dan tepinya. Sifatsifat koloni dapat dinyatakan dengan serupa pedang, duri, tasbih, titik-titik, batang, dan akar. Pembacaan hasil penanaman tergantung dari media yang ditanami (Anonim, 1993). Prosedur tes dilusi digunakan untuk mencari KHM (Konsentrasi Hambat Minimal) atau MIC (Minimal Inhibitory Concentration) yaitu konsentrasi terkecil yang masih mampu menghambat pertumbuhan (Anonim, 1993). b. Agar difusi. Media yang digunakan adalah agar Mueller Hinton. Cakram kertas saring berisi sejumlah tertentu obat ditempatkan pada permukaan medium padat yang sebelumnya telah ditanami bakteri uji. Setelah diinkubasi, media yang telah
13
ditumbuhi bakteri diukur diameter zona radikal untuk mengetahui daya hambat antibakteri (Jawetz et al., 2001). 1). Zona radikal yaitu suatu daerah di sekitar disk dimana sama sekali tidak diketemukan adanya pertumbuhan bakteri. Potensi antibiotik diukur dengan mengukur diameter zona radikal. 2). Zona irradikal yaitu
suatu daerah di sekitar disk yang menunjukkan
pertumbuhan bakteri dihambat oleh antibiotik tersebut, tetapi tidak dimatikan akan tetapi terlihat adanya pertumbuhan yang kurang subur/lebih jarang, dibanding dengan daerah diluar penga ruh antibiotik tersebut (Jawetz et al., 2001). 8. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Kromatografi lapis tipis (KLT) adalah metode pemisahan fisika kimia, dimana lapisan pemisahnya berupa bahan berbutir-butir halus yang ditempatkan pada suatu penyangga yang berupa pelat gelas, logam atau lapisan tipis lainnya yang cocok (fase diam). Campuran yang akan dipisahkan berupa larutan yang akan ditotolkan pada lapisan dengan bentuk yang tertutup rapat yang berisi larutan pengembang yang cocok (fase gerak). Pemisahan senyawa akan terjadi selama pengembangan (Stahl, 1991). Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan salah metode pemisahan dan alat uji senyawa kimia secara kualitatif dan kuantitatif. Senyawa yang diuji dapat berupa senyawa tunggal maupun campuran dari produk pabrik, hasil sintesis, isolasi dari hewan percobaan, maupun dari tanaman dan mikroorganisme. KLT merupakan metode yang mudah penggunaannya, murah dan selektif, walaupun sekarang telah dikembangkan (Sumarno, 2000 ).
14
Pengembangan KLT mengikuti perkembangan teknologi karena alat pembuat lapisan tipis, jenis fase diam, alat penotol, dan alat pelacak bercak sudah dapat dilakukan secara otomatik (Sumarno, 2001). Alat kromatogafi selain mempunyai kecepatan pemisahan kemudian cara analisisnya juga mempunyai ketelitian dan kecepatan yang tinggi. Alat pengembang juga dapat diberikan pemanas (thermostat), untuk mempercepat dilusi dan pemisahan (Sumarno, 2001). a. Fase Diam Fase diam dalam KLT adalah suatu bahan yang dibuat dari bahan–bahan berbutir–butir yang ditempatkan pada lempengan. Sifat – sifat umum dari penyerap untuk KLT adalah ukuran partikel dan homogenitasnya. Ukuran partikel yang bisa digunakan adalah 1 – 25 mikron, partikel yang butirannya sangat kasar tidak akan memberikan hasil yang memuaskan dan salah satu alasan untuk menaikkan hasil pemisahan adalah menggunakan penjerap yang butirannya halus (Sastrohamidjoyo, 1991). b. Fase Gerak Fase gerak merupakan medium yang terdiri dari satu atau lebih pelarut. Fase gerak bergerak dalam fase diam, yaitu suatu lapisan berpori karena adanya gaya kapiler tersebut menyebabkan pelarut merambat naik ke atas sehingga terjadi proses pemisahan campuran cuplikan (Stahl, 1985) c. Penentuan Kromatogram Kromatogram pada KLT merupakan noda–noda yang terpisah setelah visualisasi dengan cara fisika atau kimia. Visualisasi cara fisika yaitu dengan melihat noda kromatogram yang mengabsorbsi radiasi UV atau berfluoresensi dengan radiasi UV pada ? 254 nm atau 366 nm (Suharman, 1995).
15
Visualisasi dengan cara kimia yaitu dengan mereaksikan kromatogram dengan pereaksi warna yang memberikan warna atau fluoresensi spesifik (Suharman, 1995). d. Penilaian dan Dokumentasi Kromatogram Jarak pengembangan pada kromatogram dinyatakan dengan angka Rf atau hRf . Rf ?
Jarak yang ditempuh solut (cm) Jarak yang ditempuh fase gerak (cm)
Angka Rf antara 0,00 sampai 1,00 dan dinyatakan dalam 2 desimal dan angka h Rf adalah angka Rf dikalikan dengan faktor 100 (Sastrohamidjoyo, 1991). 9. Bioautogra fi Bioautografi merupakan metode spesifik untuk mendeteksi bercak pada kromatogram hasil KLT yang mempunyai aktivitas sebagai anti bakteri, antijamur, antibiotik, dan antiviral. Bioautografi dapat juga digunakan untuk mendeteksi antibiotik yang belum diketahui, yang mana metode kimia atau fisika hanya terbatas untuk substansi yang murni. Sementara deteksi kimia dengan reaksi warna spesifik digunakan sebagai pembanding hasil bioautografi sehingga kedua metode saling melengkapi (Stahl, 1991). Dalam prakteknya, kromatogram diletakkan pada permukaan media agar di dalam petri yang telah diinokulasi dengan mikroorganisme yang sensitif untuk antibiotik yang akan dipelajari. Setelah diinkubasi selama 12-20 jam, pada temperatur kira-kira 37 0C akan tampak zona yang jernih pada lapisan media agar yang antibiotiknya berdifusi kelapisan tersebut dan menghambat pertumbuhan
16
mikroorganisme. Sedangkan media agar yang ditumbuhi mikroorganisme akan tampak buram (Zweig dan Whitaker, 1971). Prosedur yang dikemukakan diatas dengan banyak lagi proses yang lain, hampir semuanya didasarkan pada teknik difusi agar, yaitu dengan memindahkan senyawa antibakteri dari lapisan kromatografik ke lempeng agar pembenihan melalui proses difusi. Prosedur ini memiliki beberapa kekurangan, terutama yang disebabkan oleh perbedaan difusi senyawa dari kromatogram ke lempeng agar pembenihan. Karena itu telah diupayakan suatu penyederhanaan prosedur melalui pendektesian secara langsung pada lapisan ke kromatografik. Tujuan utamanya adalah menghilangkan langkah difusi (Hamburger dan Cordell, 1987).
E. Landasan Teori Jeruk keprok (Citrus nobilis Lour) mengandung alka loid dan polisakarida kulit buahnya mengandung minyak atsiri dan kulit buahnya mengandung saponin (Hutapea, 1993). Normasani (2007) menyebutkan, minyak atsiri kulit buah jeruk nipis (Citrus aurantifolia ) memiliki potensi seba gai antibakteri terhadap E. coli dan S. aureus dengan nilai KHM terhadap S. aureus sebesar 0,625% v/v dan E. coli 1,25% v/v (Normasani, 2007). Tanaman jeruk keprok (Citrus nobilis Lour) merupakan tanaman dengan suku yang sama (Rustaceae) dengan jeruk nipis sehingga dimungkinkan minyak atsiri kulit buah jeruk keprok memiliki potensi antibakteri terhadap E. coli dan S. aureus.
17
F. Hipotesis 1. Minyak atsiri kulit bua h jeruk keprok (Citrus nobilis Lour) mempunyai aktivitas antibakteri terhadap E. coli dan S. aureus. 2. Ada komponen minyak atsiri yang mempunyai aktivitas antibakteri terhadap S. aureus dan E. coli
