UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI-FRAKSI HASIL PEMISAHAN EKSTRAK ETANOL DAUN ILER (Coleus scutellarioides L Benth) TERHADAP Escherichia coli ATCC 35218 DAN Staphylococcus aureus ATCC 25923
Skripsi Untuk memenuhi sebagian persyaratan mencapai derajat Sarjana S-1
Oleh:
Alfiatun Nur Rohmah 11630012
PROGRAM STUDI KIMIA FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SUNAN KALIJAGA YOGYAKARTA 2015
ii
iii
iv
v
vi
HALAMAN MOTTO
“Pendidikan merupakan perlengkapan paling baik untuk hari tua” (Aristoteles)
“Intelligence is not the measurement, but intelligence support all”
vii
HALAMAN PERSEMBAHAN
Sebagai rasa syukurku kepada Allah swt, kupersembahkan karya ini untuk : Bapak dan Ibuku tercinta Sebagai rasa hormat dan cintaku kepadanya, My sister, Teman-teman seperjuanganku, Serta Almamaterku prodi KIMIA UIN Sunan Kalijaga Yogyakarta
viii
KATA PENGANTAR Bismillaahirrahmaanirrahim. Alhamdulillaahirabbil’alamin. Puji dan syukur kehadirat Allah SWT atas segala limpahan nikmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi-Fraksi Hasil Pemisahan Ekstrak Etanol Daun Iler (Coleus Scutellarioides L Benth) terhadap Escherichia coli ATCC 35218 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923” dengan baik. Sholawat dan salam semoga senantiasa tercurahkan kepada junjungan kita Nabi Muhammad SAW, keluarga, para sahabat, dan seluruh umatnya terutama kita yang senantiasa mengikuti sunnahnya, Amin. Penyusun mengucapkan terima kasih kepada semua pihak yang telah memberikan dorongan, semangat, dan ide-ide kreatif sehingga tahap demi tahap penyusunan skripsi ini telah selesai. Ucapan terima kasih tersebut secara khusus disampaikan kepada: 1. Dr. Hj. Maizer Said Nahdi, M.Si selaku Dekan Fakultas Sains dan Teknologi UIN Sunan Kalijaga Yogyakarta. 2. Dr. Susy Yunita Prabawati, M.Si., selaku Ketua Program Studi dan dosen pembimbing yang telah membimbing, mengarahkan dan memotivasi hingga skripsi ini tersusun. 3. Bapak Didik Krisdiyanto, M.Sc., selaku dosen pembimbing akademik. 4. Dosen-dosen Program Studi Kimia Fakultas Sains dan Teknologi UIN Sunan Kalijaga Yogyakarta yang sudah membagi ilmu yang sangat bermanfaat.
ix
5. Bapak Wijayanto, S.Si, Ibu Isni Gustanti, S.Si, dan Bapak Indra Nafiyanto, S.Si. selaku laboran Laboratorium Kimia Universitas Islam Negeri Sunan Kalijaga Yogyakarta. 6. Orang tuaku Bapak Rohmat dan Ibu Sukamti tercinta, serta kakakku yang selalu mendoakan penyusun serta memberikan dukungan dan semangat. 7. Teman penelitian, Fina, Xarisa, Bagus, Fuad dan Heru yang selalu membantu dan mendukung terselesainya tugas akhir ini. 8. Fina, Dian, Umi, Anita dan Anggun terima kasih atas kebersamaanya dan terimakasih untuk persahabatan juga kegilaan kalian yang selalu mewarnai hidupku selama di Jogja. 9. Semua teman-temanku tercinta Program Studi Kimia khususnya angkatan 2011. 10. Serta semua pihak yang tidak dapat penyusun sebutkan satu-persatu yang telah
banyak membantu tersusunnya skripsi ini. Semoga amal baik dan segala bantuan yang telah diberikan kepada penyusun mendapatkan balasan dari Allah SWT. Akhir kata, penyusun mohon maaf yang sebesar-besarnya apabila dalam penyusunan skripsi ini terdapat kesalahan. Semoga skripsi ini dapat berguna dan bermanfat bagi penyusun dan pembaca sekalian. Yogyakarta, 18 Desember 2015 Penyusun
Alfiatun Nurrohmah NIM.11630012
x
DAFTAR ISI
Halaman HALAMAN JUDUL .................................................................................. HALAMAN PERSETUJUAN SKRIPSI .................................................... NOTA DINAS KONSULTAN .................................................................. HALAMAN PERNYATAAN KEASLIAN SKRIPSI ............................... HALAMAN PENGESAHAN .................................................................... HALAMAN MOTTO ................................................................................ HALAMAN PERSEMBAHAN ................................................................ KATA PENGANTAR ............................................................................... DAFTAR ISI .............................................................................................. DAFTAR TABEL ...................................................................................... DAFTAR GAMBAR ................................................................................. DAFTAR LAMPIRAN .............................................................................. ABSTRAK .................................................................................................
i ii iii v vi vii viii ix xi xiii xiv xv xvi
BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang ....................................................................................... B. Rumusan Masalah ................................................................................. C. Tujuan Penelitian ................................................................................... D. Manfaat Penelitian .................................................................................
1 3 4 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA DAN LANDASAN TEORI A. Tinjauan Pustaka ................................................................................... B. Dasar Teori ............................................................................................ 1. Iler (Coleus scutellarioides L Benth) ................................................. 2. Metabolit Sekunder ........................................................................... 3. Ekstraksi Metabolit Sekunder ........................................................... 4. Fraksinasi ........................................................................................... 5. Kromatografi Lapis Tipis .................................................................. 6. Kromatografi Kolom Vakum (KKV) ................................................ 7. Bakteri ............................................................................................... 8. Antibakteri ......................................................................................... 9. Uji Aktivitas Antibakteri ................................................................... 10. Skrining Fitokimia ........................................................................... 11. Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS) ......................
5 6 6 7 10 12 12 14 15 19 22 24 26
BAB III METODE PENELITIAN A. Waktu dan Tempat Penelitian ............................................................... B. Alat dan Bahan Penelitian .................................................................... 1. Alat .................................................................................................... 2. Bahan ................................................................................................. C. Prosedur Kerja .......................................................................................
27 27 27 27 28
xi
1. Ekstraksi Daun Iler ............................................................................ 2. Uji Aktivitas Antibakteri Crude Extract Daun Iler ........................... 3. Fraksinasi Crude Extract Daun Iler ................................................... 4. Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi Hasil Pemisahan Crude Extract .... 5. Skrining Fitokimia ............................................................................. 6. Identifikasi Senyawa .........................................................................
28 28 30 32 32 32
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN A. Ekstraksi Daun Iler ................................................................................ B. Uji Aktivitas Antibakteri Crude Extract Daun Iler ............................... C. Fraksinasi Crude Extract Daun Iler ....................................................... 1. Pemilihan Fasa Gerak untuk KKV .................................................... 2. Pemisahan dengan Kromatografi Kolom Vacum (KKV) ................. D. Uji Aktivitas Fraksi-Fraksi Hasil Pemisahan Crude Extract ................ E. Skrining Fitokimia ................................................................................. F. Identifikasi Senyawa dengan GC-MS ....................................................
33 34 36 36 38 38 41 42
BAB V PENUTUP A. Kesimpulan ........................................................................................... B. Saran ......................................................................................................
45 45
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ LAMPIRAN ...............................................................................................
46 49
xii
DAFTAR TABEL
Halaman Tabel 3.1
Tabel 4.1
Tabel 4.2
Tabel 4.3
Tabel 4.4
Tabel 4.5
Tabel 4.6
Fase gerak yang digunakan pada pemisahan crude extract etanol daun iler dengan Kromatografi Kolom Vakum (KKV) ........................................................................................
31
KHM crude extract etanol daun iler dengan metode difusi agar menggunakan bakteri uji Escherichia coli dan Staphylococcus aureus, tanda (+) menunjukkan adanya zona hambat, tanda (-) menunjukkan tidak terdapat zona hambat disekeliling paper disc ...................................................
35
Hasil KLT crude extract etanol daun iler menggunakan plat silika Gel F254 dengan berbagai sistem pelarut. Spot yang diperoleh dideteksi dengan lampu UV λ 254 nm ...............
37
Diameter zona hambat fraksi-fraksi hasil pemisahan crude extract etanol daun iler dengan metode difusi agar terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Tanda (-) menunjukkan tidak terdapat zonahambat disekeliling paper disc ..............................
39
Penentuan KHM fraksi 7 hasil pemisahan crude extract etanol daun iler dengan metode difusi agar menggunakan bakteri uji Escherichia coli dan Staphylococcus aureus ............
41
Hasil skrining fitokimia dari fraksi 7 hasil pemisahan crude extract etanol daun iler dengan reagen semprot sesuai dengan Harborne (1987) .............................................................
42
Hasil analisis spektra massa dari fraksi 7 hasil pemisahan crude extract daun iler ................................................................
44
xiii
DAFTAR GAMBAR
Halaman Gambar 2.1
Tanaman iler ............................................................................
7
Gambar 2.2
Struktrur senyawa alkaloid . .....................................................
8
Gambar 2.3
Struktur senyawa terpenoid .....................................................
9
Gambar 2.4
Struktur senyawa flavonoid .....................................................
10
Gambar 2.5
Bakteri Staphylococcus aureus ................................................
18
Gambar 2.6
Bakteri Esherichia coli ............................................................
19
Gambar 4.1
Aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun iler ditunjukkan dengan adanya zona bening di sekitar paper disc terhadap bakteri E.coli dan S.aureus ......................................................
34
Penentuan zona hambat pada uji antibakteri fraksi 7-11 terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus dengan metode difusi agar menggunakan paper disc ..............
40
Kromatogram GC fraksi 7 hasil pemisahan crude extract etanol daun iler ........................................................................
43
Gambar 4.2
Gambar 4.3
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman Lampiran 1.
Crude extract etanol daun iler ..................................................
49
Lampiran 2.
Hasil KHM crude extract etanol daun iler konsentrasi 11000 ppm-15000 ppm ............................................................
50
KLT hasil pemisahan crude extract etanol daun iler dengan pelarut (1) n-heksana; (2) etil asetat; (3) etanol; (4) n-heksana:etil asetat (3:1); (5) n-heksana:etil asetat (3:2); (6) n-heksana:etil asetat (2:3); (7) n-heksana:etil asetat (1:3); (8) etil asetat:etanol (3:1); (9) etil asetat:etanol (3:2); (10) etil asetat:etanol (2:3); (11) etil asetat:etanol (1:3) ....................................................................
51
Profil hasil pemisahan dengan KLT terhadap 20 fraksi hasil KKV crude extract etanol daun iler dengan eluan n-heksana : etil asetat (3:2). Totolan sampel dari 2,3,4,5,.....sampai 21 fraksi (kiri-kanan). Hasil ini dideteksi dengan lampu UV pada λ = 254 nm .........................
52
Hasil KHM fraksi 7 hasil pemisahan crude extract etanol daun iler konsentrasi 15000 ppm-5000 ppm ............................
53
Skrining fitokimia fraksi 7 hasil pemisahan crude extract etanol daun iler .........................................................................
54
Hasil analisis spektra massa .....................................................
55
Lampiran 3.
Lampiran 4.
Lampiran 5. Lampiran 6. Lampiran 7.
xv
ABSTRAK UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI-FRAKSI HASIL PEMISAHAN EKSTRAK ETANOL DAUN ILER (Coleus scutellarioides L Benth) TERHADAP Escherichia coli ATCC 35218 DAN Staphylococcus aureus ATCC 25923 Oleh : Alfiatun Nurrohmah 11630012 Dosen Pembimbing : Dr. Susy Yunita Prabawati, M.Si Iler (Coleus scutellarioides L Benth) merupakan salah satu tanaman yang secara tradisional telah digunakan untuk pengobatan berbagai penyakit. Salah satu pemanfaatan iler yang perlu dikaji lebih jauh adalah aktivitasnya sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan crude extract dan fraksi hasil pemisahan ekstrak etanol daun iler dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli ATCC 35218 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923. Penelitian ini diawali dengan maserasi pada simplisia daun iler dengan pelarut etanol. Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa crude extract etanol memiliki aktivitas antibakteri dengan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) untuk bakteri Escherichia coli ATCC 35218 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923 sebesar 15000 ppm. Crude extract etanol daun iler dipisahkan menjadi fraksi-fraksi yang lebih sederhana dengan Kromatografi Kolom Vakum (KKV). Pemisahan dengan KKV menghasilkan 21 fraksi. Hasil uji aktivitas antibakteri dengan metode difusi agar, menunjukkan bahwa fraksi 7 dan 8 aktif sebagai antibakteri. Fraksi 7 merupakan fraksi yang paling potensial sebagai antibakteri dengan nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) untuk bakteri Escherichia coli ATCC 35218 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923 adalah 8000 ppm. Skrining fitokimia menunjukkan adanya golongan senyawa alkaloid pada fraksi 7. Hasil analisis GC-MS menunjukkan adanya senyawa dodecanoic acid, 1,2,3-propenitriyl ester yang bertanggung jawab sebagai antibakteri. Kata kunci : Coleus scutellarioides L Benth, Antibakteri, Kromatografi Kolom Vakum, Skrining Fitokimia, GC-MS.
xvi
BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Penyakit infeksi yang disebabkan oleh bakteri cukup banyak ditemukan di Indonesia. Hal ini disebabkan kondisi geografis Indonesia yang merupakan daerah tropis dengan suhu dan kelembaban tinggi yang memudahkan tumbuhnya bakteri diantaranya jenis bakteri yang bersifat patogen. Selain itu, keadaaan sanitasi yang buruk menyebabkan
penyakit infeksi ini semakin berkembang.
Bakteri merupakan mikroorganisme yang dapat berdampak negatif maupun positif bagi manusia. Beberapa bakteri yang dapat menyebabkan infeksi diantaranya adalah Escherichia coli dan Staphylococcus aureus (Jawetz et al., 2001). Menurut Thomas (2004) Escherichia coli merupakan bakteri patogen penyebab diare, sedangkan Staphylococcus aureus adalah bakteri yang dapat menyebabkan berbagai infeksi pada kulit manusia seperti jerawat, bisul, impetigo, dan pneumonia (Schneewind dan Missiakas, 2009). Penanggulangan infeksi oleh mikroorganisme tersebut memerlukan obatobat yang mempunyai daya kerja optimal dan efek samping kecil. Dewasa ini, penggunaan antibiotik sangat banyak terutama dalam pengobatan yang berhubungan dengan infeksi. Akan tetapi kenyataan menunjukkan bahwa masalah penyakit infeksi tersebut terus berlanjut (Depkes, 2008). Hal ini disebabkan telah resistennya bakteri terhadap antibiotik yang digunakan (Patrick, 2007), sehingga mengakibatkan antibiotik yang ada menjadi tidak efektif lagi untuk mengobati
1
2
penyakit infeksi. Oleh karena itu, diperlukan upaya pencarian obat baru sebagai antibakteri yang dapat mengatasi permasalahan tersebut untuk menunjang peningkatan taraf kesehatan masyarakat (Volk et al,. 1990). Penggunaan obat yang berasal dari tumbuhan merupakan salah satu solusi untuk mengatasi hal tersebut. Tumbuhan memiliki senyawa-senyawa aktif yang dapat digunakan sebagai antibiotik sehingga eksplorasi terhadap senyawasenyawa aktif tersebut memiliki relevansi yang besar terkait penemuan antibiotik baru untuk mengatasi terjadinya resistensi (Wilson dan Gisvold, 2004). Salah satu tanaman yang dapat dimanfaatkan sebagai obat adalah iler (Coleus scutellarioides L Benth). Tanaman ini dapat digunakan sebagai antibakteri, antiradang, obat diare, obat bisul, obat wasir, dan penambah nafsu makan (Depkes RI, 1989). Secara tradisional tumbuhan ini digunakan dalam bentuk bahan tunggal maupun ramuan untuk penggunaan obat luar dan obat dalam. Bagian-bagian yang dapat digunakan adalah daun dan akar. Menurut Syamsuhidayat dan Hutapea (1991) daun iler (Coleus scutellarioides L Benth) mengandung beberapa senyawa metabolit sekunder, minyak atsiri, mineral, dan sedikit lendir. Hal ini menjadikan tanaman iler sebagai tanaman yang menarik untuk diteliti sehingga dapat diketahui senyawa yang berperan dalam aktivitas biologinya. Penelitian untuk mengetahui potensi daun iler (Coleus scutellarioides L Benth) sebagai antibakteri telah dilakukan oleh Poelongan (2009) yang menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun iler dapat menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella enteritidia dan Staphylococcus aureus. Penelitian lain yang
3
menguji manfaat daun iler (Coleus scutellarioides L Benth) sebagai antibakteri dilakukan oleh Kumala dan Desi (2009) yang menunjukkan bahwa crude extract etanol daun iler pada konsentrasi 10% dan 20% dapat menghambat pertumbuhan bakteri Bacillus subtilis, Salmonella paratyphosa, Staphylococcus aureus, dan Escherichia coli. Penelitian-penelitian sebelumnya hanya sebatas menentukan aktivitas antibakteri dari crude extract etanol daun iler. Pada penelitian ini ekstrak etanol akan dipisahkan menjadi beberapa fraksi. Setiap fraksi akan dilakukan pengujian lebih lanjut terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus untuk mengetahui aktivitas antibakterinya serta identifikasi senyawa aktif yang bertindak sebagai antibakteri. B. Rumusan Masalah 1.
Apakah crude extract etanol daun iler (Coleus scutellarioides L Benth) aktivitas antibakteri dan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dari terhadap pertumbuhan Escherichia coli dan Staphylococcus aureus?
2.
Bagaimana aktivitas antibakteri dan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dari fraksi-fraksi hasil pemisahan crude extract etanol daun iler (Coleus scutellarioides L Benth) terhadap pertumbuhan Escherichia coli dan Staphylococcus aureus?
3.
Identifikasi senyawa aktif apakah yang terdapat dalam fraksi-fraksi hasil pemisahan crude extract etanol daun iler (Coleus scutellarioides L Benth) yang paling potensial dalam menghambat bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus?
4
C. Tujuan Penelitian 1.
Mengetahui aktivitas antibakteri dan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dari crude extract etanol daun iler (Coleus scutellarioides L Benth) terhadap pertumbuhan Escherichia coli dan Staphylococcus aureus.
2.
Mengetahui aktivitas antibakteri dan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dari fraksi-fraksi hasil pemisahan crude extract etanol daun iler (Coleus scutellarioides L Benth) terhadap pertumbuhan Escherichia coli dan Staphylococcus aureus.
3.
Mengetahui senyawa yang terdapat dalam fraksi-fraksi hasil pemisahan crude extract etanol daun iler (Coleus scutellarioides L Benth) yang potensial dalam
menghambat
pertumbuhan
bakteri
Escherichia
coli
dan
Staphylococcus aureus. D. Manfaat Penelitian Hasil penelitan ini diharapkan dapat menjadi tambahan data penelitian tentang senyawa bahan alam bagi peneliti dan penelitian lainnya. Di samping itu, penelitian ini diharapkan dapat menjadi salah satu pertimbangan pemilihan metode penelitian dalam eksplorasi senyawa bahan alam baik isolasi maupun skrining aktivitas biologi, dan penelitian di bidang kimia yang relevan lainnya.
BAB V PENUTUP A. Kesimpulan Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan, maka dapat diambil kesimpulan sebagai berikut : 1.
Crude extract etanol daun iler menunjukkan dapat menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus dengan KHM masingmasing 15000 ppm.
2.
Fraksi 7 dan 8 hasil pemisahan dengan KKV menunjukkan aktivitas antibakteri. Fraksi 7 merupakan fraksi yang paling potensial dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus dengan KHM 8000 ppm.
3.
Senyawa yang terkandung dalam fraksi 7 hasil pemisahan crude extract etanol daun iler yang diduga mampu bertanggung jawab sebagai antibakteri yaitu senyawa dodecanoic acid, 1,2,3-propenitryil ester.
B. Saran Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan, dapat dirumuskan beberapa saran untuk penelitian selanjutnya, antara lain : Perlu dilakukan uji aktivitas lain untuk mengetahui manfaat daun Iler (Coleus L. benth) secara ilmiah.
44
DAFTAR PUSTAKA
Adijuwana, Nur M.A. 1989. Teknik Spektroskopi dalam Analisis Biologi. Bogor: Pusat Antar Universitas IPB. Anang Hermawan ., Hana Eliyani., dan Wiwik Tyasningsih. 2006. Pengaruh ekstrak daun sirih (piper bettle L) terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Universitas Airlangga. Anonim, 1993. Dasar-dasar Pemeriksaan Mikrobiologi. Universitas Gajah Mada, Yogyakarta. Ansel, H. C. 1989. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, edisi 4. Jakarta: UI Press. Arifin, Sjamsul. 1986. Kimia Organik Bahan Alam. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan: Universitas Terbuka. Ashutoh, Kar. 2008. Pharmaceutical Microbiology. New Delhi: New Age Internasional (P) Ltd. Bernasconi, G. 1995. Teknologi Kimia, Jilid 2, Edisi pertama. Jakarta: PT. Pradaya Paramita. Brooks, G.F, Butel, J.S. dan Morse S. A. 2001. Mikrobiologi kedokteran edisi pertama. Diterjemahkan oleh Bagian Mikrobiologi FK Universitas Airlangga. Salemba Medika: Jakarta. Brooks, G.F., J.S. Butel dan S.A. Morse. 2005. Medical Microbiology. New York:Mc Graw Hill. Canell, Richard J.P. 1998. Methods in Biotechnology : natural Product isolation. Edition 4. Totowa, New Jersey: Humana Press. ChunYan, H., Pu Hong, ZhenYu, and Jing, S. 2010. Evaluation of antioxidant and antitumour activities of lemon essential oil. Journal of Medicinal Plants Research.Vol. 4 (18). 1910-1915. Cseke, Leland J., Kirakosyan Ara, Kaufman, Peter B., Warber, Sara L., Duke, James A., and Brielmann, Harry L. 2006. Natural Products from plants. Second edition. London: CRC Press. Dalimartha, S. 2006. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 2. Cetakan I. Jakarta: Puspa Swara.
45
46
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1989. Materia Medika Indonesia Jilid V. Jakarta: 155-159. Dewick, Paul M. 2009. Medicinal Natural Products A Biosynthetic Approach. Third Edition. John Wiley & Sons Ltd : Chicester, West Sussex. Farida, R., Dewa, M., Titis, N & Endarwati, T. 2010. Manfaat Sirih Merah (Piper crocatum) sebagai Agen Antibakteri terhadap Bakteri Gram Positif dan Bakteri Gram Negatif. Jurnal Kedokteran dan Kesehatan Indonesia. Vol 7. 10-25. Feriyawati. 2010. Isolasi dan Identifikasi Fraksi Teraktif Antibakteri Daun Iler (Coleus scutellariodes [L.] Benth). Surakarta: FMIPA UNS. Gandjar, 2007. Ibnu Ghalib dan Abdul Rahman. Kimia Analisis Farmasi. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Ganiswara, G., Setiabudi, R., Suyatna, dan Nafrialdi. 1995. Farmakologi dan Terapi. Edisi 4. Jakarta: UI Press. Greenwood, 1995. Antibiotics, Susceptibility (Sensitivity) Test Antimikrobial and Chromatography. Mc Graw Hill Company: USA. Gritter, R.J, Bobbitt, J.M, Schwarting. 1991. Pengantar Kromatografi edisi ke dua. Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata. ITB: Bandung. Guenther, E. 2006. Minyak Atsiri. Jakarta: UI Press. Harborne J.B. 1987. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Menganalisis Tumbuhan, 2nd ed, diterjemahkan oleh Padmawinata K. Soediro I. Bandung: ITB. Herbert, R.B. 1995. Biosintesis Metabolit Sekunder. Edisi ke-2, cetakan ke-1, terjemahan Bambang Srigandono. IKIP Press: Semarang. Howe, I dan Wiliams D.H. 1981. Mass Spectrometry and Application 2th Edition. Mc Graw Hill: London. Jawetz, Melnick, dan Adelberg’s. 2001. Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta: Salemba Medika. Karou D., Savadogo A., Canini A., Yameogo S., Montesano C., Simpore J., Colizzi V., dan Traore S.A. 2006. Antibacterial activity of alkaloids from Sida acuta. African Journal of Biotechnology. Vol 5 (2). 195-200. Khopkar, S. 1990. Konsep Dasar Kimia Analitik. UI-Press. Jakarta.
47
Kumala, S., dan Desi. 2009. Aktivitas antibakteri ekstrak daun iler (Coleus atropurpureus Benth.) terhadap beberapa bakteri gram (+) dan bakteri gram (-). Jurnal Bahan Alam Indonesia. Vol. 7 (1). 12-14. McMaster, M. C. 2007. GC-MS a practical user’s guide second edition. A John Wiley & Sons, Inc. Publication. Canada. Middleton, E., Kaswandi, C., Theoharides, TC. 2000. The Effects of Plants Flavonoids on mammalian Cells: Implications For Inflammations, Heart Disease, and Cancer. The Americans Society for Pharmacology and Experimental Therapeutics. Pharmacol Rev 52. 673-751. Oliveira, Junior, Bastos, Filho1, Lopes, and Melo. 2014. Phytochemical Investigation Of Chloroform Extract From Root, Stem And Leaf Of Adenocalymma Imperatoris-Maximilianii (Wawra) L.G. Lohmam (Bignoniaceae). International Journal of Pharma and Bio Sciences. Vol. 5 (3). 70-78. Patrick G. Guilfoile, 2007. Antibiotic-Resistant Bacteria. New York: Chelsea House. Pelczar M.J. dan Chan E.C.S. 1988. Dasar-dasar mikrobiologi. diterjemahkan oleh Hadioetomo RS., Imas T., Tjitrosomo S.S., Angka S.I. Jakarta: UI Press. Poelongan, M. 2009. Uji aktivitas antibakteri ekstrak metanol daun miana (Coleus scutellariodes [L.] Benth.) terhadap bakteri Salmonella enteritidis dan Staphylococcus aureus. Jurnal Biotika. Vol. 7 (2). 61-68. Radji, M. 2011. Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran. Jakarta: Buku Kedokteran EGC. Rahman M.M., Khondkar P., dan Gray A.I. 2005. Terpenoids from Atylosia scarabaeoides and their antimicrobial activity. Dhaka Univ J. Pharm. Sci.Vol 4 (2). 141-144. Razia, M., Beulah, and Sivaramakrishnan, S. 2014. Phytochemical, Gc-Ms, Ft-Ir Analysis and Antibacterial Activity of Passiflora Edulis of Kodaikanal Region of Tamilnadu. World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. Vol. 3 (9). 435-441. Robinson, 1995. Phyto-chemistry in plants. Di dalam : Naidu AS. Natural Food Mycrobial System. CRC Press : USA.
48
Sarker, Satyajit D, and Nahar, Luthfun. 2007. Chemistry for Pharmacy Students General, organic and Natural product Chemistry. John Wiley & Sons Ltd: Chicester, West Sussex. Sarker, Satyajit D., Latif, Zahid, and Gray, Alezander I. 2006. Methods in Biotechnology : Natural Product Isolation. Edition 20. Totowa, New Jersey: Humana Press. Sastrohamidjojo, H. 2005. Kromatografi. Yogyakarta: Penerbit Liberty. Sastrohamodjojo, H., 1996. Sintesis Bahan Alam. Yogyakarta: UGM Press. Siswandono dan Soekardjo, H.B. 2008. Kimia Medisinal edisi I. Airlangga University Press: Surabaya. Stahl, E. 1985. Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi. Bandung: Penerbit ITB. Syamsuhidayat SS dan Hutapea JR. 1991. Inventaris Tanaman Obat Indonesia. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta: 168-169. Thomas, Peggy. 2004. Bacteria and Viruses. New York: Lucent Books. Volk, W.A. dan Wheler. 1990. Mikrobiologi Dasar Jilid I. diterjemahkan oleh Markham. Jakarta: Erlangga. Walton, NJ. and Brown, DE. 1999. Chemicals from plants perspectives on plant secondary products. London: Imperial College Press and World Scientific Publishing. Waluyo, Lud. 2004. Mikrobiologi Umum. Malang: UMM Press. Wattimena JR, Sugiarso NC, Widianto MB, Sukandar EY, Soemardji AA, Setiabudi AR. 1991. Farmakodinami dan Terapi Antibiotik. Yogyakarta: UGM Press. Welly Darwis, Makda Romauli, Kasrina. 2013. Uji Efektivitas Ekstrak Daun Ileriler (Coleus scutellarioides (Linn) Benth) Sebagai Antibakteri Staphylococcus aureus. Jurnal Ilmiah Konservasi Hayati. Vol. 9 (2). 55-59. Wilson, Gisvold. 2004. Textbook of organic medical and pharmaceutical chemistry, edisi kesebelas. New York: Lippincott Williams & Wilkins.
LAMPIRAN
Lampiran 1. Crude extract etanol daun iler
Crude extract etanol
Kromatografi Kolom Vakum (KKV)
20 fraksi pemisahan crude extract etanol daun iler
49
50
Lampiran 2. Hasil KHM crude extract etanol daun iler konsentrasi 11000 ppm15000 ppm
51
Lampiran 3. KLT hasil pemisahan crude extract etanol daun iler dengan pelarut (1) n-heksana; (2) etil asetat; (3) etanol; (4) n-heksana:etil asetat (1:3); (5) n-heksana:etil asetat (2:3); (6) n-heksana:etil asetat (3:1); (7) n-heksana:etil asetat (3:2); (8) etil asetat:etanol (1:3); (9) etil asetat:etanol (2:3); (10) etil asetat:etanol (3:1); dan (11) etil asetat:etanol (3:2)
52
Lampiran 4. Profil hasil pemisahan dengan KLT terhadap 20 fraksi hasil KKV crude extract etanol daun iler dengan eluen n-heksana : etil asetat (3:2). Totolan sampel dari 2,3,4,5,.....sampai 21 fraksi (kiri-kanan). Hasil ini dideteksi dengan lampu UV pada λ = 254 nm
53
Lampiran 5. Hasil KHM fraksi 7 hasil pemisahan crude extract etanol daun iler konsentrasi 15000 ppm-5000 ppm
54
Lampiran 6. Skrining fitokimia fraksi 7 hasil pemisahan crude extract etanol daun iler
(1)
(2)
(3)
Keterangan : (1) Fase gerak: Etil asetat:asam formiat:toluene:air (6:1,5:3:0,5), pereaksi FeCl3 (2) Fase gerak: Toluen: etil asetat:dietil amin (7:2:1), pereaksi Dragendorf (3) Fase gerak: dieti eter:toluene:asam asetat glasial 5% (1:1;0,2) KOHetanolik
55
Lampiran 7. Hasil analisis spektra massa
Gambar 1. Spektrum massa puncak ke-9 fraksi 7 crude extract etanol daun iler
