UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL TANAMAN YODIUM

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL TANAMAN YODIUM (Jatropha multifida L.) TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus ATCC 6538 DAN Escherichia coli ATCC 11229 SECARA IN VITRO

NASKAH PUBLIKASI Untuk Memenuhi Sebagian Persyaratan Mencapai Derajat Sarjana Kedokteran

Diajukan Oleh : MEILIYANA SILVI SANSETYAWATI J500110066

FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA 2015

1

2

ABSTRAK UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL TANAMAN YODIUM (Jatropha multifida L) TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus ATCC 6538 DAN Escherichia coli ATCC 11229 SECARA IN VITRO Meiliyana Silvi Sansetyawati1, M. Amin Romas2, Devi Usdiana Rosyidah2, 2015 Latar Belakang: Tanaman yodium (Jatropha multifida L) mengandung alkaloid, tanin, flavonoid dan saponin yang diduga mampu menghambat pertumbuhan bakteri sehingga ekstrak etanol tanaman yodium diindikasikan memiliki daya antibakteri. Tujuan: Untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol tanaman yodium terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli secara in vitro. Metode penelitian: Penelitian ini menggunakan desain penelitian eksperimental laboratorik (laboratories experiment) dengan metode post test control group design only. Subyek penelitian adalah ekstrak etanol tanaman yodium. Ekstrak diuji aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus ATCC 6538 dan Escherichia coli ATCC 11229 menggunakan metode sumuran dengan konsentrasi 5% b/v, 10% b/v, 20% b/v, 40% b/v, 60% b/v dan 80% b/v. untuk menganalisis data digunakan uji Non Parametri Kruskal-Wallis dan Mann-Whitney. Hasil: Ekstrak etanol tanaman yodium mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus pada konsentrasi 40% b/v, 60% b/v dan 80% b/v masingmasing dengan diameter zona hambat sebesar 8 mm, 9,4 mm dan 12 mm. Secara statistik, ekstrak etanol tanaman yodium mempunyai daya antibakteri yang bermakna dengan p = 0,000 (p < 0,05); namun kurang efektif bila dibandingkan dengan kontrol positif. Sedangkan pada Escherichia coli tidak mempunyai efek antibakteri pada semua konsentrasi. Kesimpulan: ekstrak etanol tanaman yodium mempunyai daya antibakteri terhadap Staphylococcus aureus ATCC 6538 pada konsentrasi 40% b/v, 60% b/v dan 80% b/v namun tidak efektif terhadap bakteri Escherichia coli ATCC 11229 secara in vitro.

Kata Kunci : ekstrak etanol tanaman yodium (Jatropha multifida L) – Antibakteri – Staphylococcus aureus – Escherichia coli 1 2

Mahasiswa Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta Dosen Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta

3

ABSTRACT ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF THE IODINE PLANT (Jatropha multifida L) ETHANOL EXTRACT AGAINST Staphylococcus aureus ATCC 6538 AND Escherichia coli ATCC 11229 IN VITRO Meiliyana Silvi Sansetyawati1, M. Amin Romas2, Devi Usdiana Rosyidah2, 2015 Background: The iodine plant (Jatropha multifida L) contains alkaloid, tanin, flavonoid and saponin are presumably able to inhibit bacteria growth so that the ethanol extract of iodine plant indicated having an antibacterial activity. Objective: To understand antibacterial activity of the iodine plant ethanol extract antibacterial against Staphylococcus aureus and Escherichia coli in vitro. Methods: This study used laboratory experimental research design (laboratories experiment) with post test only control group design method. The subject of the research was iodine plant ethanol extract. Extract would be tested with antibacterial activity against Staphylococcus aureus ATCC 6538 and Escherichia coli ATCC 11229 using wells method with a concentration of 5% b/v, 10% b/v, 20% b/v, 40% b/v, 60% b/v and 80% b/v. To analyze the data used Kruskal-Wallis non Parametri and Mann-Whitney test. Result: The iodine plant ethanol extract has antibacterial activity against Staphylococcus aureus at concentration of 40% b/v, 60% b/v and 80% b/v each with an inhibition zone diameter of 8 mm, 9,4 mm and 12 mm. Statistically it has significant antibacterial power with p = 0,000 (p < 005) but less effective compared with positive control. While Escherichia coli has no antibacterial effect at all concentration. Conclusion: The iodine plant ethanol extract has antibacterial activity against Staphylococcus aureus ATCC 6538 at concentration 40% b/v, 60% b/v and 80% b/v but not effective against the bacteria Escherichia coli ATCC 11229 in vitro.

Key Words : The iodine plant (Jatropha multifida L) – Antibacterial – Staphylococcus aureus – Escherichia coli

1 2

Students of The Faculty of Medicine Muhammadiyah University of Surakarta Lecturer Faculty of Medicine Muhammadiyah University of Surakarta

4

PENDAHULUAN Dalam usaha meningkatkan derajat kesehatan masyarakat, dilaksanakan berbagai upaya pembangunan di bidang kesehatan. Akan tetapi, banyak tantangan dan kendala yang harus dihadapi, diantaranya adalah tingginya angka penyakit infeksi di masyarakat. Lebih dari 45 % kematian di negara ASEAN adalah akibat penyakit infeksi (Wahjono, 2007). Penyakit infeksi masih menempati urutan tertinggi penyebab kesakitan dan kematian di negara-negara berkembang, termasuk Indonesia. Penyakit infeksi ini dapat disebabkan oleh bakteri, virus, parasit maupun jamur (Wahjono, 2007). Beberapa bakteri penyebab yang sering kita jumpai adalah Staphylococcus aureus dan Escherichia coli yang merupakan flora normal dalam tubuh manusia (Guyton, 2007). Penggunaan antibiotik dalam pengobatan infeksi bakteri sering kali menimbulkan resistensi. Resistensi bakteri ini telah menjadi masalah kesehatan yang mendunia (Wahjono, 2007). Untuk menanggulangi hal tersebut mulai dikembangkan penggunaan obat-obatan dari bahan alam. Obat dari bahan alam dapat diperoleh dari sumber mineral, tumbuh-tumbuhan atau hewan (Ansel, 2008). Indonesia merupakan negara tropis yang mempunyai biodiversitas tinggi, kaya akan flora dan fauna. Indonesia mempunyai ribuan jenis tanaman yang harus dilestarikan dan dimanfaatkan dengan baik. Sebagian besar dari tanaman tersebut dapat dimanfaatkan sebagai tanaman obat. Tanaman obat adalah tanaman yang berupa daun, batang, buah, bunga dan akarnya yang memiliki manfaat sebagai obat dan digunakan sebagai bahan mentah dalam pembuatan obat modern maupun obat tradisional (Peoloengan et al., 2006). Salah satu tanaman obat yang sering digunakan adalah tanaman yodium (Jatropha multifida L.) atau masyarakat Jawa sering menyebutnya tanaman jarak cina (Darmawi et al., 2013). Tanaman yodium merupakan salah satu tanaman yang memiliki banyak sekali khasiat sebagai obat tradisional, namun masyarakat Indonesia tidak banyak yang mengetahuinya. Beberapa masyarakat di daerah pedesaan memanfaatkan tanaman ini hanya sebagai obat untuk luka baru. Padahal masyarakat di Nigeria

5

menggunakan tanaman yodium sebagai obat untuk infeksi. Daun dan getahnya digunakan untuk mengobati luka infeksi pada kulit serta menyembuhkan infeksi pada lidah bayi (Sari et al., 2011). Tanaman yodium ini juga mengandung sulfur dan iodine yang berperan sebagai zat antiseptik dan mempercepat penyembuhan luka bakar (Ilmi, 2009). Kandungan kimia dalam tanaman yodium yang memiliki khasiat antabakteri yang telah diketahui diantaranya adalah alkaloid, flavonoid, tanin dan saponin (Depkes, 2000).

METODE PENELITIAN Penelitian

ini

menggunakan

desain

penelitian

eksperimental

laboratorik

(laboratoris experiment) dengan metode post test only control group design (Notoatmojo, 2010). Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Biomedik II Sub Lab Mikrobiologi dan Laboratorium Biomedik III Sub Lab Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta pada bulan November sampai dengan bulan Desember 2014. Subyek yang digunakan dalam penelitian ini adalah ekstrak tanaman yodium dengan konsentrasi 5 % b/v, 10% b/v, 20% b/v, 40% b/v, 60% b/v, dan 80% b/v. Sedangkan untuk sempel yang digunakan adalah bakteri Staphylococcus aureus ATCC 6538 dan Escherichia coli ATCC 11229. Ekstrak etanol tanaman yodium adalah ekstrak tanaman yodium yang diperoleh melalui metode maserasi dengan menggunakan larutan penyari etanol 70 %. Bakteri Staphylococcus aureus ATCC 6538 dan Eschericia coli ATCC 11229 yang di gunakan adalah merupakan biakan murni yang di peroleh dari Laboratorium Biomedik II Sub Lab Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta. Efek antibakteri ekstrak etanol tanaman yodium adalah hambatan pertumbuhan koloni bakteri pada masing-masing media Muller Hinton yang telah dibuat sumuran dan sudah di beri ekstrak etanol tanaman yodium yang sudah di konsentrasikan lalu diinkubasi pada suhu 370C selama 18-24 jam. Zona radikal diukur menggunakan alat jangka sorong dengan cara membuat dua garis tegak lurus membentuk simbol plus (+) yang melewati titik tengah dari sumuran lalu tarik lagi garis lurus diantara kedua garis tegak lurus

6

sehingga membentuk sudut 450. Kriteria pengukuran : Diameter zona radikal dalam satuan millimeter (mm) (Brooks et al., 2007). Analisis data penelitian ini mengunakan uji non parametrik Kruskal-Wallis diteruskan menggunakan uji Mann-Whitney untuk melihat perbedaan antara kelompok yang bermakna dan tidak bermakna. (Dahlan, 2010). HASIL PENELITIAN A. Staphylococcus aureus Hasil yang diperoleh dalam tabel menunjukkan bahwa dari kelima replikasi kontrol positif menunjukan adanya efek antibakteri, sedangkan untuk kontrol negatif dan ekstrak etanol tanaman yodium (Jatropha multifida L.)

dengan

konsentrasi 5%, 10% dan 20% tidak menunjukkan adanya efek antibakteri dan dengan perlakuan ekstrak etanol tanaman yodium (Jatropha multifida L.) dengan konsentrasi 40%, 60%, dan 80% menunjukan adanya efek antibakteri. Dari hasil analisa data SPSS uji Kruskall Wallis menunjukkan nilai Asymp. Sig. adalah 0,000 maka dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan daya antibakteri yang bermakna antar kelompok perlakuan.

Tabel 1. Hasil pengukuran zona radikal pada Staphylococcus aureus ATCC 6538

Replikasi 1 2 3 4 5 Mean

Kontrol + 25 25 25 25 25 25

Diameter Zona Radikal (mm) Milimeter Kontrol Ekstrak Tanaman Yodium (Jatropha multifida L) 5% 10% 20% 40% 60% 80% 6 6 6 6 7 10 12 6 6 6 6 9 9 12 6 6 6 6 8 9 11 6 6 6 6 8 11 12 6 6 6 6 8 8 13 6 6 6 6 8 9,4 12

7

Tabel 2 Hasil uji Non-parametrik Mann-Whitney Staphylococcus aureus ATCC 6538 Kelompok Perlakuan

N

P (Asymp.

Hasil Uji

Sig.) Kontrol (-) ─ konsentrasi 40%

5

0,005

Berbeda bermakna

5

0,005

Berbeda bermakna

5

0,005

Berbeda bermakna

5

0,007

Berbeda bermakna

b/v Kontrol (-) ─ konsentrasi 60% b/v Kontrol (-) ─ konsentrasi 80% b/v Kontrol (+) ─ konsentrasi 80% b/v

Untuk menilai daya antibakteri secara statistik yaitu dengan menggunakan uji yang dilakukan dengan pembanding kontrol negatif. Pada konsentrasi ekstrak 5% b/v, 10% b/v dan 20% b/v menunjukkan nilai p (Asymp. Sig.) = 1,000. Maka dapat disimpulkan bahwa ketiga konsentrasi ekstrak tersebut tidak memiliki daya antibakteri yang bermakna secara statistik karena nilai p > 0,05. Pada konsentrasi ekstrak 40% b/v, 60% b/v dan 80% b/v menunjukkan nilai p (Asymp. Sig.) = 0,005. Maka dapat disimpulkan ketiga konsentrasi ekstrak tersebut mempunyai daya antibakteri yang bermakna secara statistik karena nilai p < 0,05. Untuk

menilai

besarnya

potensi

daya

antibakteri

yaitu

dengan

menggunakan uji yang dilakukan dengan pembanding kontrol positif. Pada konsentrasi ekstrak dengan daya antibakteri paling tinggi yaitu 80% b/v menunjukkan nilai p (Asymp. Sig.) = 0,007. Nilai p tersebut < 0,05 maka terdapat perbedaan daya antibakteri yang bermakna secara statistik dan dapat disimpulkan bahwa potensi daya antibakteri pada konsentrasi ekstrak 80% b/v kurang efektif dibandingkan dengan amoksisilin sebagai kontrol positif.

8

B. Escherichia coli Hasi yang diperoleh pada tabel menunjukkan bahwa dari kelima replikasi kontrol positif menunjukan adanya efek antibakteri, sedangkan untuk kontrol negatif dan dengan perlakuan ekstrak etanol tanaman yodium (Jatropha multifida L.) dengan konsentrasi 5%, 10%, 20%, 40%, 60%, dan 80% tidak menunjukan adanya efek antibakteri. Tabel 3. Hasil pengukuran zona radikal pada Eschericia coli ATCC 11229

Replikasi 1 2 3 4 5 Mean

Kontrol + 35 35 35 35 35 35

Diameter Zona Radikal (mm) Milimeter Kontrol Ekstrak Tanaman Yodium (Jatropha multifida L) 5% 10% 20% 40% 60% 80% 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6

Semua data yang diperoleh dari hasil penelitian menunjukkan nilai rata-rata yang sama dengan kontrol negatif sehingga data tersebut tidak dilanjutkan dengan pengujian data secara statistik. PEMBAHASAN Telah diketahui bahwa tanaman yodium (Jatropha multifida L) mempunyai senyawa-senyawa yang memiliki kemampuan sebagai antibakteri seperti tanin, alkaloid,flavonoid dan juga saponin. Adanya tanin yang berfungsi sebagai antibakteri akan mengganggu sintesa peptidoglikan sehingga pembentukan dinding sel menjadi tidak sempurna. Keadaan tersebut akan mengakibatkan sel bakteri menjadi lisis karena adanya tekanan osmotik maupun tekanan fisik sehingga sel bakteri akan mati (Safera, 2005). Menurut Naim (2004), mekanisme kerja tanin sebagai antibakteri berhubungan dengan kemampuan tanin dalam menginaktivasi adhesin sel bakteri (molekul yang menempel pada sel inang) yang terdapat pada permukaan sel. Tanin yang memiliki target pada polipeptida dinding sel akan mengakibatkan

9

kerusakan pada dinding sel karena tanin adalah salah satu senyawa fenol. Pada kerusakan membran sel, ion H+ dari senyawa fenol dan turunannya (flavonoid) akan menyerang gugus polar (gugus fosfat) sehingga molekul fosfolipid akan terurai menjadi gliserol, asam karboksilat dan asam fosfat. Hal tersebut akan menyebabkan fosfolipid tidak mampu mempertahankan bentuk membran sel, akibatnya membran akan bocor dan bakteri akan mengalami hambatan pertumbuhan bahkan bakteri akan mati (Sari et al., 2011). Pada bakteri Staphylococcus aureus terbentuk diameter zona hambat pada konsentrasi ekstrak 40% b/v, 60% b/v dan 80% b/v sedangkan pada Escherichia coli pada semua konsentrasi ekstrak etanol tanaman yodium tidak terbentuk diameter zona hambat. Adanya perbedaan besarnya diameter zona hambat yang terbentuk antara bakteri Staphylococcus aureus sebagai positif gram dan Escherichia coli sebagai gram negatif disebabkan karena diameter zona hambat yang terbentuk dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor yaitu kemampuan difusi bahan uji pada media, interaksi antar komponen medium, toksisitas bahan uji dan kondisi lingkungan mikro in vitro. Adapun faktor lain yang dapat menyebabkan terjadinya perbedaan diameter zona hambat antara bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli adalah adanya perbedaan komponen dinding sel antara bakteri gram positif dan bakteri gram negatif, sehingga mempengaruhi kerja ekstrak etanol tanaman yodium sebagai antibakteri. Perbedaan kepekaan pada bakteri gram positif dan gram negatif terhadap zat antibakteri kemungkinan disebabkan oleh perbedaan struktur dinding sel seperti peptidoglikan, jumlah lipid, ikatan silang dan aktivitas enzim, yang menentukan penetrasi, pengikatan serta aktivitas antibakteri (Jawetz et al., 2008). Struktur dinding Staphylococcus aureus sebagai gram positif lebih sederhana dibandingkan dengan struktur dinding Escherichia coli yang lebih kompleks. Diameter zona hambat ekstrak etanol tanaman yodium pada Staphylococcus aureus lebih besar karena dinding selnya hanya terdiri dari beberapa lapis peptidoglikan tanpa adanya tiga polimer pembungkus yang terletak di luar lapisan peptidoglikan yaitu lipoprotein, selaput luar dan lipopolisakarida seperti yang dimiliki oleh Escherichia coli. Karena Staphylococcus aureus hanya mempunyai lapisan

10

peptidoglikan maka selnya akan mudah terdenaturasi oleh zat yang terkandung di dalam ekstrak tanaman yodium sehingga diameter zona hambatnya lebih besar (Hermawan, 2007). Staphylococcus aureus mempunyai struktur dinding sel yang mengandung polisakarida dan protein yang bersifat antigen serta mempunyai kandungan lipid yang rendah sekitar 1 – 4% (Jawetz et al., 2008). Dengan lapisan dinding yang sederhana inilah bakteri ini lebih sensitif terhadap antibakteri yang memiliki penghambatan pada dinding sel (Sari et al., 2011). Escherichia coli yang merupakan bakteri gram negatif mempunyai susunan dinding sel yang lebih kompleks. Bakteri ini memiliki dinding sel dengan kandungan lipid yang tinggi sekitar 11 – 22% dan struktur dinding sel yang berlapis tiga (multilayer) yaitu lipoprotein, membran luar fosfolipid dan lipopolisakarida. Membran luar fosfolipid dapat mengurangi masuknya zat antibakteri ke dalam sel, sehingga dinding bakteri Escherichia coli akan lebih sulit ditembus oleh zat antibakteri (Poeloengan et al., 2007). Selaput luar dinding Escherichia coli mempunyai sifat untuk menolak molekul yang yang bersifat hidrofobik maupun hidrofilik yang baik namun selaput ini juga mempunyai saluran khusus yang disebut porin, yang memudahkan difusi pasif senyawa yang hidrofilik dengan berat molekul yang rendah seperti asam amino serta glukosa. Molekul dengan berat molekul yang besar seperti antibiotic termasuk juga molekul aktif ekstrak tanaman yodium akan mengalami kesulitan dalam menembus selaput tersebut. Dengan adanya perbedaan komponen dan struktur dinding sel inilah yang menyebabkan bakteri gram negatif seperti Escherichia coli mempunyai sifat yang lebih resisten terhadap senyawa antibiotik (Jawetz et al., 2008).

KESIMPULAN Berdasarkan hasil penelitian mengenai uji aktivitas antibakteri esktrak etanol tanaman yodium (Jatropha multifida L) terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus ATCC 6538 dan Escherichia coli ATCC 11229 secara in vitro, maka dapat diambil kesimpulan bahwa ekstrak etanol tanaman yodium (Jatropha multifida L) terbukti mempunyai daya antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus ATCC 6538 pada konsentrasi ekstrak 40% b/v, 60% b /v dan 80% b/v namun tidak terbukti 11

mempunyai daya antibakteri terhadap Escherichia coli ATCC 11229 pada semua konsentrasi secara in vitro. DAFTAR PUSTAKA Ansel, H. C. 2008. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. Jakarta : Penerbit Universitas Indonesia (UI Press). pp. 606-9, 617 Brooks, G. F., Janet, S. B., & Stephen A. M. 2007. Mikrobiologi Kedokteran : Jawetz, Melnick and Adelberg. Edisi 23. Alih Bahasa oleh Mudihardi, E., Kuntaman, Wasito, E. B., Mertaniasih, N. M., Harsono, S., dan Alimsardjono, L. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC Dahlan, S. 2010. Statistik Untuk Kedokteran dan Kesehatan. Jakarta : Salemba Medika. pp. 4-12 Darmawi, Z. H. M., & Fahri, P. 2013. Daya Hambat Getah Jarak Cina (Jatropha multifida L.) Terhadap Staphylococcus aureus Secara In Vitro. Jurnal Medika Veterinaria. 7 : 113-15 Depkes RI. 2000. Inventaris Tanaman Obat Indonesia (I) Jilid 1. Departemen Kesehatan

dan

Kesejahteraan

Sosial

RI,

Badan

Penelitian

dan

Pengembangan Kesehatan. Jakarta Guyton, C. A., & John, E. H., 2007. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Text Book of Medical Physiology, 11th Edition. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC Hermawan, A. 2007. Pengaruh Ekstrak Daun Sirih (Piper betle L.) Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus Dan Escherichia coli Dengan Metode Difusi Disk. Artikel Ilmiah Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Surabaya Ilmi, A. N. 2009. Tanaman Yodium Jatropha multifida Sebagai Bahan Fortifikasi Bath (Abstrak). Karya Tulis Ilmiah Strata Satu. Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga. Surabaya Jawetz, et al. 2008. Mikrobiologi Kedokteran Jawetz, Melnick & Adelberg, Ed 23. Translation of Jawetz, Melnick and Adelberg’s Medical Microbiology, 23th Ed. Alih Bahasa Oleh Hartanto, H., et al. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC

12

Naim, R. 2004. Senyawa Antimikroba Dari Tumbuhan. Fakultas Kedokteran Hewan Dan Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor Notoatmodjo, S. 2010. Metodologi Penelitian Kesehatan. Jakarta : Rineka Cipta. pp. 55-60 Peoloengan, M., et al. 2006. Aktivitas Antimikroba Dan Fitokimia Dari Beberapa Tanaman Obat. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner. pp : 974-8 Safera, W. 2005. Optimasi Waktu Ekstraksi Terhadap Kandungan Tanin Pada Bubuk Ekstrak Daun Jambu Biji (Psidittolium) Serta Analisis Finansialnya. Malang : Jurusan Teknologi Industri Pertanian Fakultas Pertanian Universitas Brawijaya Sari, et al. 2011. Ekstraksi Zat Aktif Antimikroba Dari Tanaman Yodium (Jatropha multifida Linn) Sebagai Bahan Baku Alternatif Antibiotik Alami. Laporan Penelitian. Fakultas Kimia dan Teknik Universitas Diponegoro Wahjono, H. 2007. Peran Mikrobiologi Klinik Pada Penanganan Penyakit Infeksi. Semarang : Badan Penerbit Universitas Diponegoro

13