Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 11 No.1 Februari 2014
IDENTIFIKASI BAKTERI OXACILLIN RESISTANT STAPHYLOCOCCUS AUREUS (ORSA) PADA ULKUS PENDERITA DIABETES MELLITUS DI RUANG PERAWATAN BEDAH RUMAH SAKIT UMUM DAERAH (RSUD) TASIKMALAYA
R. Suhartati ,Elyza Nur Faidah Program Studi DIII Analis Kesehatan STIKes Bakti Tunas Husada Tasikmalaya
ABSTRAK
Staphylococcus aureus adalah bakteri kokus Gram positif yang menimbulkan penyakit infeksi pada manusia.Pasien diabetes mellitus yang mempunyai luka terbuka akan lebih mudah mengalami infeksi Staphylococcus aureus. Saat ini telah ditemukan strain Staphylococcus aureus yang resisten terhadap methicillin yang disebut Methicillin ResistantStaphylococcus aureus (MRSA). MRSA disebut juga ORSA (Oxacillin Resistant Staphylococcus aureus).ORSA/MRSA bersifat kebal terhadap beberapa jenis antibiotik sehingga pengobatannya menjadi sulit.Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi keberadaan bakteri ORSA pada ulkus penderita diabetes yang dirawat di ruang perawatan bedah RSUD Tasikmalaya. Metode penelitian ini bersifat deskriptif, dilaksanakan bulan meiterhadap 4 pasien ulkus penderita diabetes melitus yang dirawat di RSUD Tasikmalaya. Dari hasil penelitian didapat dari 4 sampel diperoleh satu sampel resisten terhadap antibiotik oxacillin dengan rata-rata diameter zona hambat 8,5 mm, sedangkan 2 sampel lainnya sensitif dengan rata-rata diameter zona hambat 23.5 mm dan 25,5mm. Kesimpulan dari hasil penelitian yang dilakukan pada ulkus penderita diabetes mellitus yang dirawat di ruang perawatan bedah RSUD Tasikmalaya didapat hasil ditemukannya bakteri MRSA/ORSA dari 4 sampel yang diisolasi terdapat 1 sampel positif ORSA (Oxacillin Resistant Staphylococcus aureus) dengan presentasi sebesar 25 %.
susunannya bergerombol seperti buah
BAB IPENDAHULUAN Dalam beberapa tahun terakhir,
anggur.Bakteri ini menimbulkan penyakit
angka kejadian penyakit infeksi semakin
pada manusia. Tubuh yang terinfeksi oleh
meningkat,
Staphylococcus aureus mempunyai tanda-
infeksi
termasuk yang
angka
kejadian
disebabkan
oleh
tanda
yang
khas,
yaitu
peradangan,
Staphylococcus aureus.Orang – orang
nekrosis, dan pembentukan abses (Warsa,
yang
U.C, 1994 : 103).
paling rentan
terhadap
infeksi
Staphylococcus aureus adalah mereka
Sampai
sekarang,
antibiotik
yang mempunyai sistem pertahanan tubuh
golongan betalaktam seperti penisilin
yang lemah, anak yang baru dilahirkan,
masih dipergunakan untuk pengobatan
pasien bedah dan luka bakar (Volk.A.W &
terhadap infeksi penyakit yang disebabkan
Wheeler F.M, 1990 : 151).
oleh
Staphylococcus bakteri
kokus
Gram
aureus, positif
adalah yang
bakteri
Staphylococcus
aureus.
Namun saat ini telah ditemukan strain dari Staphylococcus
aureus
yang
resisten
161
Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 11 No.1 Februari 2014
terhadap penisilin. Resistensi terhadap
antibiotik yang tidak rasional (Pratiwi T.S,
penisilin
2008 : 168).
disebabkan
Staphylococcus aureus
karena
menghasilkan
ORSA merupakan salah satu bakteri
enzim ß-Laktamase yang merusak cincin
pencetus infeksi nosokomial, yaitu infeksi
ß-Laktam. ß-Laktamase membuka cincin
yang didapat di rumah sakit oleh seorang
ß-Laktam penisilin dan menghilangkan
penderita selama perawatan. ORSA dapat
aktivitas antimikrobanya. Oleh karena itu
bertahan
selanjutnya
antibiotik
lingkungan yang kering seperti debu,
methicillin untuk pengobatan infeksi oleh
udara dan sprei (Karnadihardja, 1989 :
Staphylococcus
131).
digunakan
aureus
yang
resisten
terhadap penisilin (Jawetz, Melnick & Adelberg’s, 2005 : 110 ).
dengan
baik
pada
Penyebab infeksi ORSA yang terjadi
Dewasa ini, ditemukan pula adanya
hidup
di
penggunaan
Rumah
Sakit
antibiotik
dikarenakan yang
tidak
strain Staphylococcus aureus yang resisten
terkontrol, penularan dari pasien ke pasien
terhadap
disebut
atau kontak dengan penderita, dari udara
ResistantStaphylococcus
dalam ruangan yang tercemar bakteri
aureus (MRSA) (Schaeffler, 1989 : 132 –
ORSA, dari fasilitas ruangan misalnya
134).MRSA
ORSA
selimut atau kain tempat tidur, kurangnya
Staphylococcus
kebersihan para petugas kesehatan dalam
aureus).MRSA dan ORSA adalah nama
melakukan perawatan kepada pasien dan
yang berbeda untuk satu jenis bakteri yang
tidak adanya ruang isolasi bagi pasien
sama. Efektifitas oksasilin dan methisilin
yang sudah terinfeksi ORSA. Akibat
terhadap bakteri Staphylococcus aureus
adanya infeksi ORSA sebagai infeksi
adalah sama (Sutedjo AY, 2008 : 74).
nosokomial
methicillin
Methicillin
(Oxacillin
disebut Resistant
Sebagai
akibat
dan
juga
dari
inilah
yang
dapat
infeksi
memperpanjang masa perawatan pasien di
ORSA/MRSA yang multiresisten ini maka
Rumah Sakit dan kondisi yang semakin
pemilihan antibiotik untuk terapi menjadi
memburuk.
semakin sulit (Chambers HF, 1997 :
infeksi ORSA sangat sulit diperoleh dan
10).Bakteri menjadi resisten terhadap
mahal sehingga menjadi beban berat
oksasilin dan methisilin karena terjadi
pasien (Nurkusuma D.D, 2009 : 4).
produksi protein alami pengikat penisilin
Pasien
Apalagi
diabetes
antibiotik
mellitus
untuk
yang
PBP 2a (Penicillin Binding Proteins) yang
mempunyai luka terbuka akan lebih
memiliki afinitas rendah pada pengikatan
mudah
oksasilin dan methicillin. Selain itu ORSA
mempunyai daya tahan tubuh yang lemah
mengalami resistensi karena perubahan
dan adanya gula darah yang tinggi
genetik
menjadi tempat yang strategis untuk
yang
disebabkan
paparan
mengalami
infeksi,
karena
pertumbuhan bakteri (Hastuti T.R, 2008 :
162
Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 11 No.1 Februari 2014
11).Berdasarkan latar belakang diatas,
Media yang telah dilarutkan dalam
penulis
melakukan
erlenmeyer diautoclave pada tekanan
penelitian identifikasi bakteri ORSA pada
1-2 atm, dengan suhu mencapai 110-
ulkus penderita Diabetes Mellitus yang
1200C, selama 15-20 menit, supaya
dirawat di ruang perawatan bedah Rumah
mikroorganisme dan spora dimatikan.
Sakit
tertarik
Umum
untuk
Daerah
(RSUD)
Tasikmalaya.
2. Pembuatan Media a. Media MSA Bacto ekstrak daging sapi 0,2 gram,
METODE PENELITIAN
Proteosa pepton 2 gram,NaCl 15 gram,
Alat
manitol 2 gram, merah fenol 0.05
Peralatan
yang
digunakan
penelitian
adalah
Inkubator
dalam memert,
Sterilisator
kering,
autoklaf,turbidimeter,tabung reaksi, cawan petri, swab steril, objek glass, jangka sorong.
gram, aquadest 200 ml ditimbang dan dilarutkan dalam erlenmeyer (sambil dipanaskan)
kasa
kemudian disterilkan. b. Muller Hinton Agar (Difcco)
dilarutkan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Pewarnaan Gram, media Agar darah, media Manitol Salt Agar, Mueller Hinton Agar, kertas cakram oxacillin 1 ug, larutan garam fisiologis steril, larutan asam sulfat 1%, larutan barium klorida 1 %.
(sambil
dipanaskan)
di
dalam erlenmeyer, ditutup dengan kasa kemudian disterilkan. c. Media Agar Nutrient Timbang 3 gram bacto ekstrak daging, 10 gram bacto pepton, 15 gram bacto agar, 5 gram NaCl, masukan ke dalam erlenmeyer,
kemudian
dilarutkan
dalam 1 liter aquadest. Panaskan
PROSEDUR PENELITIAN
sambil di aduk sampai tercampur
1. Sterilisasi
dengan
Sterilisasi Alat Sebelum melakukan penelitian alat-alat yang terbuat dari gelas seperti cawan tabung,
erlenmeyer,
batang
pengaduk, dan lain-lain dibungkus rapi dengan
dengan
7,6 gram dalam 200 ml aquadest
Bahan
petri,
ditutup
kertas
payung,
kemudian
dimasukkan ke dalam oven untuk sterilisasi selama 2 jam pada suhu 1600C. sedangkan sterilisasi media
sempurna.Kemudian
angkat
dan lubang erlenmeyer ditutup dengan penutup kassa, erlenmeyer ditutup dengan kertas payung dan diikat dengan
tali,
kemudian
disterilkan.Biarkan agak dingin sekitar suhu 40-450C, kemudian masukkan ke dalam cawan petri. 3. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Alur kerja isolasi bakteri dari spesimen a. Hari 1 ( Pengambilan Sampel )
163
Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 11 No.1 Februari 2014
Luka
terlebih
dahulu
dibersihkan
ditandai terbentuknya gumpalan putih
dengan NaCl fisiologis, kemudian
pada kaca objek.Untuk kontrol negatif
dilakukan swab dengan kapas lidi
dipakai suspensi tanpa diberi plasma
steril, kemudian dimasukkan pada
sitrat.
media TSB steril. Inkubasi 24 jam o
37 C secara aerob.
c. Kultur Kultur bertujuan untuk memperbanyak
b. Hari 2 ( Penanaman pada media MSA
koloni yang sama. Kultur dilakukan
dan pewarnaan gram)
dengan
Sampel swab pada media TSB di amati
tersangka Staphylococcus aureus dari
pertumbuhannya. Hasil positif ditandai
media MSA, kemudian tanamkan pada
dengan adanya kekeruhan.Jika positif
media Agar Nutrien dan inkubasi
terdapat pertumbuhan bakteri lakukan
selama 24 jam pada suhu 370C.
pewarnaan
gram.Setelah
dilakukan
cara
mengambil
koloni
4. Uji Kepekaan (Sensitifity)
pewarnaan gram, diambil 1 ose bulat
Uji
kepekaan
terhadap
steril kemudian ditanam pada media
oxocillin
MSA. Inkubasi 24 jam pada suhu 37oC
staphylococcus
secara aerob.
metisilin dengan menggunakan cara
untuk
antibiotik menentukan
aureus
resisten
c. Hari 3 (identifikasi)
difusi cakram Kirby – Baurer pada agar
Alur kerja identifikasi bakteri hasil isolasi
Mueller
dari spesimen
adapun
langkah-
langkahnya sebagai berikut :
a. Pengamatan Koloni Setelah
Hinton,
inkubasi
a. Pembuatan standar Brown I jam
Pembuatan Standar Brown I (Gerard
dilakukan pengamatan terhadap koloni-
Bonang dan Enggar S.K, 1997 : 190-
koloni bakteri yang tumbuh pada
191).
Media
Sebanyak 1 ml BaSO4 dalam Natrium
Salt
selama
Agar
48
Staphylococcus
aureus pada manitol Salt Agar bila
Citrat
bersifat
kemudian dimasukkan ke dalam tabung
memfermentasikan
manitol
1
%
menjadi asam sehingga media di
reaksi.Ke
sekitar koloni terlihat berwarna kuning,
ditambahkan
bulat, elevasi cembung.
1%.Kedua
b. Uji Koagulase Plasma Tes
koagulase
(larutan
dalam
tabung
9 ml jenis
b)
dipipet,
reaksi
natrium citrat
larutan
tersebut
dicampurkan.
plasma
dilakukan
b. Pembuatan Suspensi Kuman
dengan cara membuat suspensi bakteri
Inokulum
di atas kaca objek dengan larutan
mengambil tiga sampai lima koloni
plasma sitrat, lalu digoyang-goyang
yang sama dari kuman yang akan diuji
dan setelah 10 detik diperiksa ada
pada cawan petri dengan menggunakan
tidaknya
ose. Koloni yang diambil tadi lalu
koagulasi.
Hasil
positif
dibuat
dengan
cara
164
Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 11 No.1 Februari 2014
dimasukkan pada sebuah tabung reaksi
5) Diinkubasikan
dalam
inkubator
0
yang berisi 10 ml NaCl fisiologis steril
pada suhu 37 C selama 24-28 jam.
sehingga terbentuk suspensi bakteri
Sesudah
yang akan diuji.Suspensi tersebut lalu
masing-masing
dibandingkan dengan standar Brown 1,
diameter cakram) diukur dan dicatat
kalau terlalu keruh ditambah NaCl
dalam
fisiologis
diinterpretasikan
steril,
sebaliknya
kalau
diinkubasi,
diameter
zona
mm.
Hasil menurut
dari
(termasuk
kemudian diameter
terlalu encer ditambah koloni kuman,
kritik. Pengukuran dapat dilakukan
sampai dicapai kekeruhan yang sama
dengan menggunakan jangka sorong
dengan standar.
atau penggaris (NCCLS, 1997 : 7-8
c. Uji sensitifity Antibiotik Oxacillin Metode Kirby-Bauer
dan 11-12). Diameter zona hambat = diameter zona
1) Dimasukkan kedalam media Muller
keseluruhan – diameter kertas cakram.
Hinton suspensi bakteri sebanyak 1
Hasil dikatakkan resisten apabila diameter
ml.
zona < 10 mm, dikatakkan sensitif apabila
2) Dengan menggunakan lidi kapas
diameter zona ≥ 13 mm dan dikatakan
steril lalu digoreskan pada semua
intermediet apabila diameter zona 11 – 12
permukaan media sebanyak 3 kali,
mm (Clinical and Laboratory Standard
cawan petri diputar dengan sudut
Institude (CLSI), 2007).
600. 3) inokulum
dibiarkan
mengering
selama 3-5 menit pada suhu kamar. 4) Cakram antibiotik diletakkan pada
HASIL
ANALISIS
DAN
PEMBAHASAN Berdasarkan hasil pengamatan isolasi
inokulum diatas permukaan agar
dan identifikasi bakteri MRSA/ORSA
dengan pinset steril.
dapat dilihat pada table dibawah ini :
Tabel 1. Hasil Pengamatan pada Media Manitol Salt Agar Sampel
Warna koloni
Diameter 2mm
Warna media sekitar koloni Kuning
1
Kuning emas
2 3 4
Tersangka Staphylococcus aureus
Kuning emas
2mm
Kuning
Staphylococcus aureus
Kuning emas
2mm
Kuning
Staphylococcus aureus
Tabel 2.Hasil uji plasma koagulase Nomor sampel 1 3 4
Hasil (+) aglutinasi (+) aglutinasi (+) aglutinasi
165
Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 11 No.1 Februari 2014
Pada tabel 2.diperoleh hasil isolasi bakteri
yaitu
Staphylococcus
bahwa bakteri tersebut merupakan bakteri
aureus
Staphylococcus patogen yang memiliki
memberikan hasil positif pada uji plasma
enzim koagulasi mampu menggumpalkan
koagulase. Hasil positif ditandai dengan
plasma citrat pada permukaan bakteri.
adanya aglutinasi hal ini menunjukan Tabel 3.Hasil uji resistensi pada media MH Muller Hinton Zona hambat Diameter 1 Diameter 2 23 mm 24 mm 25 mm 26 mm 8 mm 9 mm
Sampel 1 3 4
Rata-rata
Keterangan
23,5 mm 25,5 mm 8,5 mm
Sensitif Sensitif Resisten
Pada table 3. diperoleh hasil satu
Umum Daerah Tasikmalaya, ditemukan
sampel dari 4 isolat menunjukkan resisten
bakteri Staphylococcus aureus resisiten
terhadap antibiotik oxacillin yang ditandai
Oxacillin atau ORSA sebanyak 25%.
dengan zona hambatan sekitar antibiotik dengan luas ≤10 mm. Sedangkan 2 sampel lainnya
menunjukkan
hasil
dengan
ukuran
luas
sensitif zona
hambatanterhadap antibiotik ≥13 mm. Sehingga keberadaan bakteri ORSA dapat ditemukan dari ulkus penderita sebesar 25 %.
REKOMENDASI Merekomendasikan melakukan penelitian lanjutan
untuk
dapat
gambaran
MRSA
infeksi
nosokomial
memberikan
terhadap di
kejadian RSUD
Tasikmalaya. DAFTAR PUSTAKA
Penyebab terdapatnya ORSA pada ulkus penderita diabetes mellitus yang dirawat di ruang perawatan bedah RSUD Tasikmalaya
diprediksiberasal
dari
penularan dari pasien ke pasien, dari udara dalam ruangan yang tercemar bakteri ORSA, dari fasilitas ruangan misalnya selimut atau kain tempat tidur, tidak optimalnya
sterilisasi
ruang
yang
dilakukan di ruang perawatan, dan tidak tersedianya ruang isolasi bagi pasien yang terinfeksi ORSA. KESIMPULAN Berdasarkan hasil penelitian dapat ditarik kesimpulan bahwa Rumah Sakit
Gerard
Bonang
&
Enggar
Koeswardono, Kedokteran
S.
Mikrobiologi
untuk
Laboratorium
dan klinik, Gramedia, Jakarta, 1997. Hastuti Tri Rini, Faktor-Faktor Resiko Ulkus Diabetika Pada Penderita Diabetes Mellitus. Tesis, Semarang (Tesis) , 2008. Jawetz,
Melnick
&
Adelberg’s,
Mikrobiologi Kedokteran , Salemba Medika, Jakarta, 2005. Karnadiharja W, Pengendalian infeksi luka operasi ; Materi penataran dan pelatihan
keterampilan
petugas
dokter dan perawat angkatan 1
166
Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada Volume 11 No.1 Februari 2014
dalam bidang pengendalian infeksi nosokomial,
RSUP
Dr.Hasan
Sadikin Bandung, 1989. Nurkusuma
D.D,
Faktor
yang
Berpengaruh Terhadap Kejadian Methicillin Staphylococcus
Resistant Aureus
(MRSA)
Pada kasus Infeksi Luka Pasca Operasi di Ruang Perawatan Bedah Rumah
Sakit
Dokter
Kariadi
Semarang, Semarang (Tesis), 2009. Pratiwi T.S, Mikrobiologi Farmasi , Erlangga , Jakarta, 2008. Schaeffler S, Methicillin Resistant Strain of Staphylococcus aureus Resistant to Quinolones,Journal of clinical microbiologi,1989. Sutedjo
AY,
Mengenal
Obat-Obatan
Secara Mudah dan Aplikasinya dalam Perawatan, Amara Books, Yogyakarta, 2008. Volk.A.W & Wheeler F.M, Mikrobiologi Dasar. Erlangga, Jakarta, 1990. Warsa, U.C., Sanitoso A.U.S. dan fera S. Efektivitas Cefmetazaole terhadap MRSA, Bagian Mikrobiologi FKUI Jakarta,1994.
167
