EFEK EKSTRAK DAUN SIRIH MERAH TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Bacillus cereus ATCC 14745 DAN Shigella flexneri ATCC 12022 SERTA MEKANISME PENGHAMBATANNYA SKRIPSI Untuk memenuhi sebagian syarat memperoleh derajat Sarjana S1 Program Studi Biologi
disusun oleh Restuningtias Dwi Prahastiwi 09640019
PROGRAM STUDI BIOLOGI FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UIN SUNAN KALIJAGA YOGYAKARTA 2014
MOTTO Tak ada usaha yang tak ada hasilnya. Hanya saja setiap usaha memiliki cara tersediri untuk menjawab kesuksesannya. (Tias)
Sesungguhnya ALLAH S.W.T . tidak akan mengubah suatu kaum, kecuali kaum itu sendiri yang mengubah apa-apa yang ada dalam diri mereka. (Ar-Ra’d : 11)
iii
HALAMAN PERUNTUKKAN (DEDICATION) Alhamdulillaah, tak henti terucap syukur kepada
ALLAH S.W.T yang selalu memberikan kekuatan dan kesabaran pada penulis
hingga titik akhir penulisan skripsi ini. Penulis menyadari, kalau bukan karena ridho dan karunia-NYA, penulis tidak mungkin sampai pada tahap ini. Kepada kedua orang tua ku, ibu Fatimah dan bapak Suhartoyo,
yang sudah mengerti jatuh bangun dalam berproses. Terimakasih atas segala doa, pengorbanan, nasihat dan segenap dukungannya selama ini. Skripsi ini ananda
persembahkan untukmu, meskipun ananda tau tak akan mampu membalas segala cinta dan kasih sayangmu.
Kepada adikku Sinta, kaulah pemicu semangatku,
keceriaanmu selalu menjadi energi untukku. Terimakasih atas doa dan suntikan semangatnya hingga membuatku tak takut akan kegagalan. Karya kecil ini ku dedikasikan untukmu.
Kepada almamaterku, disinilah jalanku dipertemukan
dengan orang-orang hebat yang berpegang teguh pada Islam. Terimakasih telah mengajarkan banyak hal hingga pada akhirnya ku bisa meghasilkan karya sederhana ini. Semoga karya ini bermanfaat.
iv
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat, hidayah, serta inayah-Nya yang berupa kesehatan, lindungan, serta bimbingan kepada penulis, sehingga laporan Skripsi yang berjudul “EFEK EKSTRAK DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav) TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Bacillus cereus ATCC 14745 dan Shigella flexneri ATCC 12022 SERTA MEKANISME PENGHAMBATANNYA” ini berjalan dengan lancar dan dapat diselesaikan dengan baik. Skripsi ini disusun untuk memenuhi sebagian persyaratan guna mencapai gelar derajat Sarjana-S1 Program Studi Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Sunan Kalijaga Yogyakarta. Penyusunan laporan Skripsi ini tidak dapat terselesaikan dengan baik tanpa adanya dukungan dari berbagai pihak. Oleh karena itu pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada : 1. Bapak Prof. Drs. H. Akhmad Minhaji, M.A. Ph.D. selaku Dekan Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Sunan Kalijaga Yogyakarta. 2. Ibu Anti Damayanti H,M.Mol Bio. selaku Ketua Program Studi Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Sunan Kalijaga Yogyakarta. 3. Bapak M. Ja’far Luthfi, Ph. D. selaku Dosen Penasehat Akademik.
v
4. Ibu Arifah Khusnuryani, S. Si., M. Si selaku Dosen Pembimbing Skripsi yang telah banyak meluangkan waktu dengan ikhlas dan penuh kesabaran memberikan bimbingan, arahan, motivasi, petunjuk dan segala bentuk bantuan dalam menyelesaikan skripsi ini. 5. Ibu Erni Qurotul Ainy, S. Si., M. Si dan ibu Esti Wahyu Widowati, M. Si., M. Biotech selaku penguji yang telah banyak memberi banyak bimbingan berupa masukan dan saran dalam penulisan skripsi ini. 6. Ibu Fatimah dan bapak Suhartoyo tercinta yang senantiasa mengiringi proses ini dengan do’a, pengorbanan dan dukungannya kepada penulis serta memberikan dorongan baik moril maupun materil. 7. Adikku Sinta, matahari kecilku, keceriaanmu adalah pemicu semangat terbesar di hidupku. Terimakasih doa dan dukungannya selama proses skripsi ini. 8. Sahabat sekaligus partner kepercayaanku Ismantoro, yang telah memberi dukungan dalam bentuk doa, motivasi, masukan, dan bantuannya selama proses penyelesaian skripsi ini. 9. Sahabatku tersayang, Vivi, Manda, Winda, Desi dan Enstania, yang telah memberikan suntikan semangatnya dalam proses pengerjaan skripsi ini. ‘always be best friend!!’. 10. Teman seperjuangan Viroh dan Shilvi serta teman kost Al-Hidayah Saroh, mba Ninis, Zarul dan Dozi yang telah memotivasi dan menguatkan penulis hingga mampu mengerjakan skripsi ini hingga akhir. Matur nuwun.
vi
11. Teman-teman di Lab. Mikrobiologi, mba Titin, mba Elma, mba Afrizka, mba Fenny, mba Marfi, mas Adi, Firdaus dan Diki yang telah banyak membantu dalam bentuk motivasi dan doa. Bahagianya bersama kalian menjadi pemicu untuk selalu memberikan yang terbaik dalam pengerjaan skripsi ini. 12. Tim Laboran Biologi dan Kimia UIN Sunan Kalijaga Yogyakarta (Mas Doni, mba Ethik, Mbak Anif, dan Pak Indra) yang telah banyak membantu melancarkan penelitian ini. 13. Keluarga besar Biologi 09, yang telah memberikan dukungan dalam bentuk nasihat, motivasi, maupun doanya. Thank’s all dan salam -together we can-. 14. Segenap Staff Fakultas Sains dan Teknologi UIN Sunan Kalijaga, serta pihakpihak lain yang tidak dapat disebutkan satu persatu. Akhir kata, penulis hanya bisa berdo’a semoga amal baik yang telah diberikan oleh semua pihak di atas mendapatkan pahala dan ridho Allah SWT. Amiin Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih jauh dari kata sempurna, oleh karena itu saran dan kritik yang bersifat membangun sangat penulis harapkan demi kesempurnaan skripsi ini.Penulis berharap semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi penulis pada khususnya dan pembaca pada umumnya dan semoga penulisan skripsi ini mendapatkan ridho dari Allah SWT. Aamiin ya rabbal ‘alaamiin. Yogyakarta, 2 Juni 2014 Penulis vii
DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL ................................................................................................ HALAMAN PENGESAHAN.................................................................................. i HALAMAN PERSETUJUAN ................................................................................ ii HALAMAN PERNYATAAN BEBAS PLAGIARISME......................................iii MOTTO ....................................................................................................................iv HALAMAN PERSEMBAHAN ..............................................................................v KATA PENGANTAR..............................................................................................iv DAFTAR ISI.............................................................................................................ix DAFTAR TABEL ....................................................................................................xii DAFTAR GAMBAR................................................................................................xiii DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................................xiv ABSTRAK ................................................................................................................xv BAB I PENDAHULUAN........................................................................................1 A. Latar Belakang .........................................................................................1 B. Rumusan Masalah ....................................................................................5 C. Tujuan ......................................................................................................5 D. Manfaat Penelitian ...................................................................................5 BAB II TINJAUAN PUSTAKA .............................................................................7 A. Tanaman Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav ..............................7 1. Klasifikasi Tanaman Sirih Merah ......................................................9 2. Manfaat Tanaman Sirih Merah ..........................................................10 B. Senyawa Metabolit Sekunder Tanaman .................................................11 1. Alkaloid .............................................................................................12 2. Flavonoid ...........................................................................................12 3. Tanin ..................................................................................................13 4. Saponin ..............................................................................................14 5. Terpenoid ...........................................................................................14 viii
C. Metode Ekstraksi (Maserasi) ..................................................................15 D. Bakteri ....................................................................................................17 1. Bakteri Gram Positif .........................................................................17 2. Bakteri Gram Negatif .......................................................................20 E. Fase Pertumbuhan Bakteri......................................................................23 F. Antibakteri .............................................................................................24 G. Mekanisme Kerja Antibakteri ...............................................................26 H. Hipotesis .................................................................................................29 BAB III METODE PENELITIAN .........................................................................30 A. Waktu dan Lokasi Penelitian ...................................................................30 B. Alat dan Bahan Penelitian .......................................................................30 C. Prosedur Penelitian .................................................................................31 1. Ekstraksi Daun Sirih Merah ...............................................................31 2. Pembuatan Media ...............................................................................33 3. Persiapan Bakteri ................................................................................33 4. Penentuan Fase Pertumbuhan .............................................................34 5. Uji Aktivitas Antibakteri dengan Metode Difusi Cakram (Paper disk) ............................................................................................35 6. Mekanisme Kerusakan Sel ................................................................36 BAB lV HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................................38 A. Hasil........................................................................................................38 1. Ekstraksi Daun Sirih Merah ...............................................................38 2. Penentuan Fase Pertumbuhan Bakteri Uji .........................................39 3. Uji AktivitasAntibakteri Ekstrak Daun Sirih Merah pada Berbagai Fase Pertumbuhan Bakteri Uji ...........................................................41 4. Mekanisme Penghambatan (Pengaruh Ekstrak Etil asetat Daun Sirih Merah terhadap Kerusakan Sel..................................................43 B. Pembahasan ............................................................................................46 1. Ekstraksi Daun Sirih ..........................................................................46 ix
2. Penentuan Fase Pertumbuhan Uji ......................................................50 3. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Sirih Merah pada Berbagai Fase Pertumbuhan Bakteri Uji ...........................................................51 4. Mekanisme enghambatan (Pengaruh Ekstrak Etilasetat Daun Sirih Merah terhadap Kerusakan Sel..................................................56 BAB V PENUTUP....................................................................................................59 A. Kesimpulan .............................................................................................59 B. Saran........................................................................................................59 DAFTAR PUSTAKA ...............................................................................................60 LAMPIRAN..............................................................................................................68
x
DAFTAR TABEL
Halaman Tabel 1. Jenis pelarut organik dan sifat fisiknya.......................................................16 Tabel 2. Perbedaan struktur dan dinding sel bakteri Gram positif dan Gram negatif ..............................................................................................21 Tabel 3. Hasil ekstraksi daun sirih merah (Piper crocatum) dengan pelarut etil setat dan etanol......................................................................................39 Tabel 4.Hasil pengamatan pertumbuhan bakteri Bacillus cereus ATCC 14745 danShigella flexneri ATCC 12022 ..............................................................39 Tabel 5. Aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat daun sirih merah terhadap Bakteri B.cereus ATCC 14745 dan S.flexneri ATCC 12022......................41 Tabel 6. Absorbansi asam nukleat dan protein bakteri B.cereus ATCC 14745 dengan perlakuan ekstrak etil asetat daun sirih merah yang terukur pada panjang gelombang 260 nm dan 280 nm.............................................44 Tabel 7. Absorbansi asam nukleat dan protein bakter S.flexneri ATCC 12022 dengan perlakuan ekstrak etil asetat daun sirih merah yang terukur pada panjang gelombang 260 nm dan 280 nm.............................................44
xi
DAFTAR GAMBAR
Halaman Gambar 1. Tanaman sirih merah .........................................................................9 Gambar 2. Struktur alkaloid ...................................................................................12 Gambar 3. Struktur flavonoid .................................................................................13 Gambar 4. Struktur tanin ........................................................................................14 Gambar 5. Struktur saponin ....................................................................................14 Gambar 6. Sel Bakteri Bacillus cereus ATCC 14745 ............................................19 Gambar 7. Sel Bakteri Shigella flexneri ATCC 12022...........................................22 Gambar 8. Ekstrak daun sirih merah ......................................................................38 Gambar 9. Kurva pertumbuhan B.cereus ATCC 14745 dan S.flexneri ATCC 12022.........................................................................................40 Gambar 10. Histogram uji aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat daun sirih merah terhadap fase pertumbuhan bakteri B.cereus ATCC 14745 ......42 Gambar 11. Histogram uji aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat daun sirih Merah terhadap fase pertumbuhan bakteri S.flexneri ATCCC 12022 ..42 Gambar 12. Histogram absorbansi asam nukleat dan protein bakteri B.cereus ATCC 14745 dengan perlakuan ekstrak etil asetat daun sirih merah yang terukur pada panjang gelombang 260 nm dan 280 nm ................44 Gambar 13. Histogram absorbansi asam nukleat dan protein bakter S.flexneri ATCC 12022 dengan perlakuan ekstrak etil asetat daun sirih merah yang terukur pada panjang gelombang 260 nm dan 280 nm ................45
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman Lampiran 1. Diagram alir pembuatan ekstrak..........................................................68 Lampiran 2. Perhitungan rendemen ekstrak.............................................................69 Lampiran 3. Perhitungan konsentrasi ekstrak ..........................................................69 Lampiran 4 Perhitungan koloni bakteri...................................................................69 Lampiran 5. Diagram alir uji aktivitas antibakteri ..................................................70 Lampiran 6. Hasil uji aktivitas antibakteri ...............................................................70 Lampiran 7. Perhitungan diameter zona hambat......................................................74 Lampiran 8. Diagram alir uji kebocoran sel.............................................................75 Lampiran 9. Gambar alat dan bahan ........................................................................75
xiii
EFEK EKSTRAK DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav) TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Bacillus cereus ATCC 14745 dan Shigella flexneri ATCC 12022 SERTA MEKANISME PENGHAMBATANNYA Restuningtias Dwi Prahastiwi 09640019
ABSTRAK Tanaman sirih merah mengandung metabolit sekunder yang berupa alkaloid, flavonoid, polifenol, tannin, minyak atsiri, saponin, eugenol, dan fenil propada (Amalia dan Fitriai, 2002). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak daun sirih merah dengan pelarut etil asetat dan etanol pada berbagai fase pertumbuhan dan mengetahui pengaruh ekstrak daun sirih merah terhadap kerusakan sel bakteri B.cereus ATCC 14745 dan S.flexneri ATCC 12022. Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut etil asetat dan etanol. Penentuan fase pertumbuhan dilakukan pada jam ke-0, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 14, 16, 18, 25 dengan menggunakan metode pour plate. Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode difusi cakram menggunakan konsentrasi ekstrak 50%; 25%; 12,5%; 6,25%; 3%; 1,5% dan 0,5% terhadap fase-fase pertumbuhan bakteri uji. Mekanisme penghambatannya yang dilihat adalah kebocoran asam nukleat dan protein dengan menggunakan spektrofotometri UV. Fase adaptasi ditetapkan pada jam ke-1 inkubasi, fase eksponensial pada jam ke-8 inkubasi, sedangkan fase stasioner pada jam ke-16 inkubasi. Uji aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun sirih merah tidak mampu menghambat kedua bakteri uji, sedangkan ekstrak etil asetat daun sirih merah mampu menghambat pertumbuhan bakteri B.cereus ATCC 14745 dan S.flexneri ATCC 12022. Hambatan terbesar pada kedua bakteri ditunjukkan pada konsentrasi 6,25%. Konsentrasi 1,5% ekstrak etil asetat daun sirih merah masih menghambat bakteri S.flexneri ATCC 12022 ketika fase eksponensial. Hasil uji kebocoran sel dan protein menunjukkan bahwa telah terjadi kebocoran asam nukleat dan protein pada bakteri B.cereus ATCC 14745 dan S.flexneri ATCC 12022 yang diberikan ekstrak etil asetat daun sirih merah. Peningkatan kebocoran asam nukleat dan protein selaras dengan peningkatan konsentrasi ekstrak yang diberikan. Kata kunci: Bacillus cereus ATCC 14745, Piper crocatum Ruiz & Pav, Shigella flexneri ATCC 12022.
xiv
BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Bakteri Bacillus cereus dan bakteri dari genus Shigella adalah bakteri patogen yang seringkali mencemari bahan pangan dan menyebabkan gangguan saluran pencernaan (gastrointestinal). B.cereus mampu memproduksi eksotoksin dan mampu menyebabkan penyakit diare. Menurut Buckle et al (2010), B.cereus merupakan genus
Bacillus
yang
lebih
sering
mengkontaminasi
makanan,
terutama
mengkontaminasi makanan yang mengandung bahan dasar nasi. Adapun bakteri genus Shigella mampu memproduksi enterotoksin berupa toksin Shiga. Shigella flexneri merupakan anggota genus Shigella yang memiliki presentase tinggi dalam menyebabkan disentri (Zein, 2004), yaitu sebesar 25% (Supardi dan Sukamto, 1999). Disentri terjadi karena nekrosis pada sel-sel mukosa saluran usus. diindikasikan dengan munculnya diare.
Disentri
Secara etiologi, diare yang disebabkan
adanya infeksi pada usus disebut enteric infection. Diare ini masuk dalam kategori diare akut dengan mekanisme inflammatory, yakni diare yang disertai lendir dan darah (bloody diarrhea) (Zein, 2004). Secara umum, berbagai infeksi yang disebabkan oleh bakteri dapat diobati dengan menggunakan antibiotik (Ashutoh, 2008).
Akan tetapi yang menjadi
permasalahan pokok dari penggunaan antibiotik adalah terjadinya resistensi beberapa bakteri terhadap antibiotik yang digunakan (Lohner dan Austria, 2001). Menurut 1
2
Todar (2009), genus Shigella mampu mengembangkan resistensi terhadap agen antimikroba karena penggunaan antibiotik yang tidak tepat, sehingga mengakibatkan antibiotik yang ada menjadi tidak efektif lagi untuk mengobati penyakit infeksi. Oleh sebab itu, perlu adanya penemuan baru atau mengganti antibiotik yang sudah tidak efektif sebagai obat. Hal tersebut mendorong untuk ditemukannya obat pengganti yang lebih efektif, murah, aman bagi tubuh, dan tersedia dalam jumlah yang besar sehingga diharapkan resistensi antibiotik dapat diatasi. Pengobatan menggunakan senyawa tumbuhan merupakan salah satu alternatif untuk mengatasi hal tersebut. Sebenarnya, pemanfaatan tanaman sebagai bahan baku untuk keperluan obat merupakan warisan nenek moyang yang cukup lama dengan cara pengolahan yang sederhana.
Menurut Wilson (2004), tumbuhan memiliki
senyawa-senyawa aktif yang dapat digunakan sebagai antibiotik sehingga eksplorasi terhadap senyawa-senyawa aktif tersebut memiliki relevansi yang besar terkait penemuan antibiotik baru untuk mengatasi terjadinya resistensi.
Selain itu,
diharapkan penggunaan antibiotik dari senyawa alami tumbuhan dapat lebih aman untuk tubuh dalam penggunaan jangka panjang. Salah satu tanaman yang dapat dimanfaatkan sebagai obat antibakteri adalah Piper crocatum yang biasa dikenal dengan tanaman sirih merah. Tanaman sirih merah merupakan tanaman yang mudah untuk diperbanyak dengan stek dan tidak perlu perlakuan khusus ketika mengembang biakannya (Indri et al., 2008). Menurut Suratmo (2009), sirih merah banyak mengandung bahan antibiotik dan analgetik yang
3
sangat berguna untuk menyembuhkan penyakit infeksi. Namun masyarakat masih kurang memanfaatkan sirih merah dalam pengobatan dan lebih tertarik untuk menjadikannya sebagai tanaman hias dengan membudidayakan secara komersial (Indri et al., 2008). Selain itu, sirih merah masih terus dikaji sebagai alternatif obat alami terhadap masalah infeksi bakteri. Berdasarkan penelitian sebelumnya, diketahui bahwa ekstrak daun sirih merah memiliki efektifitas yang baik dalam menghambat pertumbuhan Pityrosporum ovale dan dapat digunakan sebagai pengobatan alternatif terhadap ketombe (Oktaviani, 2012).
Hasil ekstrak etanol daun sirih merah dengan dosis 50 mg/kg BB
menunjukkan efek antiinflamasi yang paling besar di antara dosis yang digunakan terhadap tikus putih (Fitriyani et al., 2011).
Penelitian oleh Hadhana (2011)
menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat dan metanol daun sirih merah memiliki sifat antibakteri terhadap Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Pada penelitian tersebut menunjukkan bahwa ekstrak non polar (N-heksana) daun sirih merah tidak mampu menghambat B. subtilis, S. aureus dan E. coli, sehingga pada penelitian ini dipilih dua pelarut yaitu pelarut semipolar dan polar. Dalam pencarian alternatif obat yang efektif untuk menanggulangi masalah infeksi bakteri, diperlukan adanya penentuan fase pertumbuhan bakteri.
Hal ini
disebabkan pada fase eksponensial mikroba terjadi pertumbuhan sel yang sangat cepat dan teratur serta semua bahan dalam keadaan seimbang (Madigan et al., 2003). Irianto (2010) menambahkan bahwa mikroba pada fase eksponensial lebih sensitif
4
terhadap aktivitas anibiotik dibandingkan pada fase stasioner. Selain itu, bakteri yang terus berkembang dan mampu mempertahankan hidupnya pada fase stasioner akan segera beradaptasi dengan lingkungan yang minim nutrien. Jika hal tersebut terjadi maka bakteri akan mengembangkan sifat resistensinya.
Dengan demikian,
diharapkan ditemukan alternatif obat masalah infeksi bakteri yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri pada fase eksponensial tersebut. Alternatif obat infeksi bakteri dapat menyebabkan terganggunya metabolisme sel bakteri yang akhirnya mampu menghambat pertumbuhan bakteri atau bahkan menyebabkan kematian bakteri. Menurut penelitian Parhusip (2006), kerusakan sel diawali dengan rusaknya membran sel yang berlanjut dengan keluarnya material isi sel dan akhirnya sel mengalami kematian. Oleh karena itu alternatif obat infeksi bakteri yang ditemukan diharapkan mampu merusak membran sel bakteri. Adanya masalah-masalah di atas seperti infeksi bakteri B.cereus dan S.flexneri yang menyebabkan gangguan gastrointestinal dan pengembangan sifat resistensi yang juga dipengaruhi fase pertumbuhan bakteri, menggugah penulis untuk mengkaji daun sirih merah yang dinilai mampu menjadi alternatif penanganan masalah infeksi bakteri tersebut.
Bakteri B.cereus dan S.flexneri masing-masing sudah mewakili
kelompok bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif sehingga dapat digunakan sebagai acuan penentuan spektrum aktivitas antibakteri daun sirih merah. Penelitian ini juga akan mengkaji aktivitas antibakteri pada berbagai fase pertumbuhan bakteri uji serta mekanisme penghambatannya.
5
B. Rumusan Masalah 1. Bagaimanakah aktivitas antibakteri ekstrak daun sirih merah dengan pelarut etil asetat dan etanol terhadap B.cereus ATCC 14745 dan S.flexneri ATCC 12022 pada berbagai fase pertumbuhan? 2. Bagaimanakah pengaruh ekstrak etil asetat dan etanol daun sirih merah terhadap mekanisme penghambatan bakteri B.cereus ATCC 14745 dan S.flexneri ATCC 12022? C. Tujuan Penelitian 1. Mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak daun sirih merah dengan pelarut etil asetat dan etanol terhadap B.cereus ATCC 14745 dan S.flexneri ATCC 12022 pada berbagai fase pertumbuhan. 2. Mengetahui pengaruh ekstrak etil asetat dan etanol daun sirih merah terhadap kerusakan sel bakteri B.cereus ATCC 14745 dan S.flexneri ATCC 12022. D. Manfaat Penelitian 1. Dapat memberikan informasi mengenai aktivitas antibakteri daun sirih merah pada fase-fase pertumbuhan bakteri B.cereus ATCC 14745 dan S.flexneri ATCC 12022 serta mekanisme kerusakan sel bakteri yang ditimbulkan akibat adanya senyawa antibakteri yang terdapat pada daun sirih merah. 2. Menjadi dasar penelitian berikutnya dalam mengembangkan bahan alam, khususnya sirih merah sebagai alternatif antibakteri.
6
3. Masyarakat semakin termotivasi untuk membudayakan tanaman sirih merah yang nantinya juga dapat menambah nilai ekonomi.
BAB V PENUTUP A. Kesimpulan 1. Ekstrak etil asetat daun sirih merah pada konsentrasi 6,25% memberikan hambatan tertinggi pada setiap fase pertumbuhan bakteri B.cereus ATCC 14745 dan S.flexneri ATCC 12022 dan memberikan sensitifitas lebih tinggi selama fase eksponensial.
Ekstrak etanol daun sirih merah tidak mampu menghambat
pertumbuhan bakteri B.cereus ATCC 14745 dan S.flexneri ATCC 12022. 2. Ekstrak etil asetat daun sirih merah lebih mampu merusak membran sel S.flexneri ATCC 12022 dibandingkan B.cereus ATCC 14745 dengan adanya tingkat kebocoran asam nukleat dan protein yang lebih besar. B. Saran Perlu dilakukan uji ekstrak daun sirih merah terhadap bakteri uji yang lain. Selain itu perlu dilakukan adanya uji lanjutan analisis mekanisme penghambatan aktivitas antibakteri yang lain, seperti pengamatan morfologi SEM, uji kebocoran ion-ion, dan uji hidrofobisitas sel.
59
DAFTAR PUSTAKA Adam, MR dan Moss MO. 1995. Food Microbiology. The Royal Society of Chemistry. Ahmad, I., Aqil, F., dan Owais, M. 2006. Modern Phytomedicine: Turning Medical Plants into Drugs. WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA: Weinheim. Amalia, Erna, dan Fitriai Normasari, SP. 2002. Tata Cara Praktis Budidaya Tanaman Obat dan Pembuatan Obat Tradisional (Sebuah Persembahan dari PJ Sekar Kedhaton). PJ Sekar Kedhaton: Yogyakarta. Alfarabi, M. 2008. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Sirih Merah. Skripsi Institut Pertanian Bogor, Bogor. Ansel, IIC. 1989. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. Edisi IV. UI Press: Jakarta. Ashutoh, K. 2008. Pharmaceutical Microbiology.New Age International (P) Ltd: New Dehli. Atlas, R. M., dan Richard, B. 1987. Microbial Ecology : Fundamentals and Applications (Second Edition). The Benjamin Cummings Publishing Company: California. Aziz, AA. 2009. Penentuan Kadar Air dan Minyak Sawit Mentah (CPO) Pada Tangki Penyimpanandi Pabrik Kelapa Sawit PT. PN 1V Kebun Adolina. Karya Ilmiah D3. Universitas Sumatera Utara. Padang. Baraja, M. 2008. Uji Toksisitas Ekstrak Daun Ficus elastica Nois ex Blume terhadap Artemia salina Leach dan Profil Kromatografi Lapis Tipis. Skripsi Fakultas Farmasi. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Surakarta. Bernasconi, G. 1995. Teknologi Kimia. Jilid 2, Edisipertama. PT Pradaya Paramita: Jakarta. Branen, A. L.dan Davidson PM. 1993. Antimicrobialin Food Marcel Dekker: New York. Breed, S., E.G.D. Murray.,R.M. Smith. 1975. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology. 7thEdition. Balliere, Tyndall&Cox Ltd: London. Brock, TD dan Madigan MT. 2003. Biology of Microoganisms.Sixth edition. Prentice Hall International: Mexico. 60
61
Browning, BL. 1996. Methods of Wood Chemistry. Vol I, II. Interscience Publishers. New York. Buckle, KA., Edwards, RA., Fleet, GH., Wootton, M. 2010. Ilmu Pangan, Terjemahan Purnomo AH.UI Press: Jakarta. Bunduki MMC, Flanders KJ, Donelly CW. 1995.Metabolic and structural sites of damage in heat and sanitizer-inured population of Listeria monocytogenes. J.Food Protect. 58: 410-415. Chia, ML., Preston, JK dan Wei, CL. 2000. Antibacterial Mechanism of AllylIsothiocyanate. J.of Food Protection 63 (6): 727-734. Cowan, MM. 1999. Plant Products as Antimicrobial Agents. J.Clinical Microbiology Reviews; 12(4): 564–582. Damayanti, R., Mulyanto dan Mulyono. 2006. Khasiat dan maanfaat daun sirih:Obat mujarab dari masa ke masa. AgroMedia Pustaka: Jakarta. Davis, WW. dan Stout, TR. 1971. Disc Plate Methods of Microbiological Antibiotic Assay. Microbiology 22: 659-665. Dewi, FK. 2010. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah Mengkudu (Morinda citrifolia L.) terhadap Bakteri Pembusuk Daging Segar. Skripsi Jurusan Biologi FMIPA. Universitas Sebelas Maret. Surakarta. Dzen, SM. 2003. Bakteriologi Medik. Edisi 1. Bayumedia Publishing: Malang. p 187197 & 223-234. Fardiaz, S. 1989. Mikrobiologi Pangan. PAU Pangan dan izi Institut Pertanian Bogor: Bogor. Fitriyani, A., Winarti, L., Muslichah, S., Nuri. 2011. Uji Antiflamasi Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah (Piper crocatum) Ruiz & Pav) Pada Tikus Putih. Majalah Obat Tradisonal. Fakultas Farmasi Universitas Jember, Jember. Frazier, F dan Westhoff W. 1988. Food Microbiology. Tata Mc Graw Hills Pub. Co Limited: NewYork. Ganiswara, G., Setiabudi, R., Suyatna, dan Nafrialdi. 1995. Farmakologi dan Terapi, edisi 4. UI Press: Jakarta.
62
Graf, AB. 1992. Tropica. Color Cyclopedia of Exotic Plants and Trees. Fourth Edition. Roehrs Company-Publiher East Rutherford NJ: U.S.A 07073. 822. Granum, P. E. 1994. Bacillus cereus and its toxins. Di dalam Lund, B. M., baird Parker, T. C, dan G. W. Gould (eds.). 2000. The Microbiological Safety and Quality of Food. Volume II. Aspen Publisher Inc., Maryland. Greenwood , Slock RCB, Reutherer JF. 1992. Medical Microbiology. 14th Edition. London: Langman Group Ltd. P: 305-315. Guenther, E. 2006. Minyak Atsiri. UI Press: Jakarta. Handayani, S. 2010. Artikel Kimia: Analisa dan Khasiat daun salam. Padang Hadhana,F. 2011. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak n-Heksana, Etilasetat, dan Metanol Daun Sirih Merah (Piper crocatum) serta Identifikasi Senyawa Aktifnya. Skripsi Program Studi Kimia. UIN Sunan Kalijaga Yogyakarta. Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan Ed ke-3. Bandung (ID): ITB. Harborne, JB. 2006. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Menganalisis Tumbuhan Ed ke-2. ITB: Bandung. Hagerman, AE. 2002. Tanin Handbook. Department of chemistry and Biochemistry. Oxford, Miami University. USA Heat, HB dan Reineccius, G. 1987. Flavour Chemistry and Technology. Von Nostrand Reinhold co. New York. Herbert RB. 1995. Biosintesis Metabolit Sekunder. Bambang Srigandono, penerjemah. Edisi kedua. Semarang: IKIP Semarang Press. Terjemahan dari: The Biosynthesis of Secondary Metabolites. Heyne K., 1987. Tumbuhan Berguna Indonesia. Jilid 1. (Terjemahan). Badan Libang Kehutanan: Jakarta. Husein, HB. 1998. Teknik Pemisahan Kimia dan Fisika. Ganeca: Jakarta. Indri, WW., Anthoni, MSS dan Setyorini, W. 2008. Sirih Merah. Balai Kajian Teknologi Pertanian Yogyakarta: Yogyakarta.
63
Inggit, PA dan Esti, M. 2011. Karakteristik Morfologi Daun Sirih Merah: Piper crocatum Ruiz & Pav dan Piper porphyrophyllum N.E.Br. Koleksi Kebun Raya Bogor. Pusat Konservasi Tumbuhan Kebun Raya Bogor. Penelitian Hayati Edisis Khusus: 7A (83-85). Irianto, K. 2010. Mikrobiologi Menguak Dunia Mikroorganisme Jilid 1. CV. Yrama Widya: Bandung. Jawetz, E., Adelberg, EA and Melniek, J. 2005. Mikrobiologi Kedokteran Terj. Enugroho dan Maulana RF. Edisi ke-20. Jakarta: EGC. Juliantina, FR. 2008. Manfaat Sirih Merah (Piper crocatum) Sebagai Agen Anti Bakterial Terhadap Bakteri Gram Positif dan Gram Negatif. J. kedokteran Kesehatan Indonesia. Kanazawa, AI. 1995. Laboratory Handbook for the Fractionation of Natural Extract.Chapan & Hall. London. Kardinan dan Taryono. 2003. Tumbuhan Obat Lembaga Biologi Nasional LIPI. Balai Pustaka: Jakarta. Karsinah, LHM., Suharto dan Mardiastuti, HW. 1993. Batang Negatif Gram dalambuku Mikrobiologi Kedokteran, Edisi Revisi. Binarupa Aksara: Jakarta. Khanbabaee, K. dan Ree, TV. 2001. Tannins: Classification and Definition. Nat Prod Rep, 18: 641-649 Kim, JM., Marshal, MR., Wei, CI. 1995. Antibacterial activity of some essential componants against five food borne pathogens. J. Agric. And Food Chem. 43:2839-2845. Lay, BW dan Sugyo, H. 1992. Analisis Mikroba di Laboratorium. PT. Raja GrasindoPersada: Jakarta. Lenny, S. 2006. Isolasi dan Uji Bioaktifitas Kandungan Kimia Utama Puding Merah dengan Metoda Uji Brine Shrimp. Skripsi Fakultas MIPA. Universitas Sumatera Utara. Medan. Lin, CM., James, FP, Cheng, IW. 2000. Antibacterial mechanism of ally lisothiocyanate. J. of Food.Protect. 61:727-734. Lohner, K., dan Austria, G. 2001. Development of Novel Antimicrobial Agent: Emerging Strategies. England: Horizon Scientific Press.
64
Lucchini, S., Liu, H., Jin, Q., Hinton, JC., and Yu, J. 2005. Transcriptional adaptation of Shigella flexneri during infection of macrophages and epithelial cells: insights into the strategies of a cytosolic bacterial pathogen. Infect Immun 73: 88–102. Madigan, MT., Martinko, JM., Parker, J. 2003. Brock Biology of Microorganism. Tenth Edition.Southern Illinois University Carbondale. Manoi, F. 2007. Sirih merah sebagai tanaman multi fungsi. Warta Puslitbangbun: 13(2). Makkar, H.P dan R. Singh, R. 2002. The Potential of Mulberry Foliage as a feed Suplement. 139-154. Maleki, S., Seyyednejad, SM., Damabi, MN., dan Motamedi, H. 2008. Antibacterial activity of the fruits of Irianian Torilis leptophylla againts some clinical pathogens.Pakistan Journal of Biological Sciences. 11(9): 1286-1289. Markham, KR. 1998. Cara Mengidentifikasi Flavonoid. ITB: Bandung Middleton, E., Kaswandi, C., Theoharides, TC. 2000. The Effects of Plants Flavonoids on mammalian Cells: Implications For Inflammation, Heart Disease, and Cancer. The Americans Society for Pharmacology and Experimental Therapeutics, Pharmacol Rev 52:673-751. Miksusanti, Jennie, BSL,. Panco, B., dan Trimulyadi, G. 2008. Kerusakan Dinding Sel Escherichia coli K1.1 oleh Minyak Atsiri Temu Kunci (Kaempferia pandurata), Berita Biologi 9(1):1-8. Mufid, K. 2010. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa. Skripsi Fakultas Sains dan Teknologi, Malang. Mutschler, E. 1991. Dinamika Obat, Edisi 5. Penerbit Institut Teknologi Bandung: Bandung. hlm. 649. Mycek MJ, Harvey RA, Champe PC. 1997. Farmakologi Ulasan Bergambar. Terjemahan Hartanto. Widya Medika: Jakarta. Naim, R. 2004. Senyawa Antimikroba dari Tumbuhan.FKH dan Sekolah Pascasarjana Ipb.Diakses tanggal 10 Feruari 2014.
65
Naufalin, R. 2005. Kajian sifat antimikroba ekstrak bunga kecombrang (Nicolaia speciiosa Horan)terhadap berbagai mikroba pathogen dan perusak pangan. Disertasi Sekolah Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Ni’mah, A. 2012. Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi-fraksi Hasil Pemisahan Ekstrak Etilasetat dan Metanol Daun Sirih Merah (Piper crocatum) terhadap Escherichia coli, Staphylococcus aureus, dan Bacillus subtilis. Skripsi Program Studi Kimia UIN Sunan Kalijaga Yogyakarta. Nychas dan Tassou. 2000. Tradicional preservatives-oiland spices. Encyclopedia of food microbiology volume 1.Academy Press London. Oktaviani, D. 2012. Uji Banding Efektivitas Ekstrak Daun Sirih Merah (Piper crocatum) dengan Zinc Pyrithione 1% Terhadap Pertumbuhan Pytyrosporum ovale pada penderita berketombe. Skripsi Fakultas Kedikteran Umum Universitas Dipenogoro, Semarang. Parhusip, A. 2006. Kajian mekanisme antibakteri ekstrak andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC) terhadap bakteri pathogen pangan. Disertasi Sekolah Pascasarjana. Intitut Pertanian Bogor. Pelczar, MJ dan Reid, RD. 1979. Microbiology. Mc Graw Hill Book Co: New York. Pelczar MJ, dan Chan, ECS. 2010. Dasar-dasar Mikrobiologi. Volume ke-1,2. Hadioetomo RS, Imas T, Tjitrosomo SS, Angka SL, penerjemah. Jakarta: Universitas Indonesia Press. Terjemahan dari: Elemen of Microbiology. Pieta, P.G. 2000. Flavonoids as Anti-oxidants. J. Nat. Prod. 63, 1043-1046. Plewig G, Jansen T. 2008. Seborrhoic dermatitis. In: Freedberg IM, Elsen AZ, Wolf K, Austen KF, Goldsmith LA, Katz SI, editors. Fitzpatrick’s Dermatology in General Medicine 6th Edition. McGraw-Hill: New York. Pratiwi, I. 2009. Uji Antibakteri Ekstrak Kasar Daun Acalypha indica terhadap Bakteri Salmonella choleraesuis dan Salmonella typhimurium. Skripsi. Jurusan Biologi FMIPA. UNS. Surakarta. Priyanto. 2008. Farmakoterapi dan Termminologi Medis. Depok: Leksonfi. Hlm. 157 Rismita, S., Ruspadi dan Siti, RA. 2010. An Alphabetical List of Plant Species Cultivated in the Bogor Botanic Gardens. Center for Plant Conservation Bogor Botanic Gardens. Indonesian Institute of Sciences: Republic of Indonesia. 220.
66
Robinson. 1995. Phyto-chemistry in plants. Di dalam: Naidu AS. Natural Food Mycrobial System. CRC Press: USA. Safitri, M., dan Fahma, F. Potency of Piper crocatum decoction as an antihyperglycemia in rat strain Sprague Dawley. Hayati J Biosci. 2005:15(1):45 Salim A. 2006. Potensi rebusan sirih merah (Piper crocatum) sebagai senyawa antihiperglikemia pada tikus putih galur Sprague-Dawley.Skripsi Institut Pertanian Bogor. Sampurno. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan. Jakarta. 3-4, 10-12, 13-19. Sastrohamidjojo. 1996. Kimia Minyak Atsiri. Penerbit Universitas Gadjah Mada: Yogyakarta. Schlegel, HS dan Schmidt K. 1994. Mikrobiologi Umum. Ed. Ke 6. Terjemahan Tedjo Baskoro. Gadjah Mada University Press: Yogyakarta. Steenis, CGGJ van (ed.). 1972. Flora Malesiana. Series 1: Spermatophyta. Vol.5. Groningen: Wolters-Noordhoff Pubvlishing. Stratford, M. 2000. Traditional preservatives-organic acids. Didalam: Robinson RK, Batt CA. Patel PD, editors. Encyclopedia of Food Microbiology.Volume 1. Academic Press: London. Sudarmadji, S., Haryono, B., Suhardi. 2007. Analisa Bahan Makanan dan Pertanian.Yogyakarta. Liberty: Yogyakarta Sudewo, B. 2005. Basmi penyakit dengan sirih merah. PT AgromediaPustaka: Jakarta. Supardi, I dan Sukamto. 1999. Mikrobiologi Dalam Pengolahan dan Keamanan Pangan. Yayasan Adikarya IKAPI: Bandung. Suratmo. 2009. Potensi Ekstrak Daun Sirih Merah (Piper Crocatum) Sebagai Antioksidan. Skripsi Fakultas MIPA. Universitas Brawijaya. Malang. Tan, H dan Rahardjo, K. 2002. Obat-obat Penting, Edisi 5. Elek Media Komputindo: Jakarta. Hlm. 228-240.
67
Tina, R. 2007. Uji Aktivitas Hasil Penyarian Biji Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa) Terhadap Beberapa Penyebab Infeksi Kulit. Skripsi Fakultas Farmasi. Universitas Padjajaran. Bandung. Todar, K. 2009. Online Text Book of Bacteriology.University of Wisconsin-Madison Department of Bacteriology. Tortora, GJ. Funke, BR., Case, CL. 2001. Microbiology an Introduction 7th edition. Addison Wesley Longman: UnitedStates America. Trijani, S. 2012. Pengembangan Potensi Antibakteri Kelopak Bunga Hibiscus sabdariffa L. (Rosella) Terhadap Streptococcus sanguinis Penginduksi Gingivitis Menuju Obat Herbal Tersandar. Fakultas Kedokteran Gigi. Ultee, A., Slump, RA., Steging, G dan Smid EJ. 2000. Antimmicrobial activity of carvacrol toward Bacillus cereus on rice. J Food Prot Vol 63 No. 5: 620-624. Verpoorte, R. and A.W. Alfermann. 2000. Metabolic engineering of plant secondary metabolism. Springer.1-3pp. Voight, R. 1994. Buku PelajaranTeknologi Farmasi, Terjemahan oleh S. Noerono. UGM Press: Yogyakarta. Volk and Wheeler. 1993. Mikrobiologi Dasar. Terjemahan Soenarto Adisoemarno. Erlangga: Surabaya. Waluyo, L. 2007. Mikrobiologi Umum. Universitas Muhammadiyah Malang Press: Malang. Watson, DG. 2005. Analisis Farmasi. Penerbit Buku Kedokteran: Jakarta Wilson, G. 2004. Textbook of organic medical and pharmaceutical chemistry, edisi kesebelas. Lippincott Williams & Wilkins: New York. Wink, M. 2008. Ecological Roles of Alkaloids, dalam Wink, M., Modern Alkaloids, Structure, Isolation Synthesis and Biology,Wiley: Jerman. Zein, U., 2004. Diare Akut Infeksius Pada Dewasa. Universitas Sumatera Utara: Medan.
LAMPIRAN Lampiran 1. Diagram alir pembuatan ekstrak Daun sirih merah kering
dihaluskan Ditimbang Dimaserasi dengan etilasetat selama 24 jam Disaring
Ampas
Filtrat
Dimaserasi dengan etanol selama 24 jam
Evaporasi
Disaring
Ekstrak etil asetat Filtrat
Ampas
Evaporasi Ekstrak etanol
68
69
Lampiran 2. Perhitungan rendemen ekstrak R (%) =
x 100 %
Keterangan:
R= Rendeman (%) A= Berat ekstrak kasar (gram) B= Berat awal bahan (gram)
1.
R. ekstrak etil asetat =
x 100 % = 3,39 % 100 g
2.
R. ekstrak etanol
=
x 100 % = 6,52 % 100 g
Lampiran 3. Perhitungan konsentrasi ekstrak Konsentrasi (%) = 1. 50%
=
=
=
2. 25%
=
=
=
3. 12,5%
=
=
=
4. 6,25%
=
=
5. 3%%
=
=
=
6. 1,5%%
=
=
=
7. 0,5%%
=
=
=
=
Lampiran 4. Perhitungan koloni bakteri Jumlah total mikroba (CFU/mL): jumlah koloni x faktor pengenceran *Faktor pengenceran:
1 Tingkat pengencer
70
Lampiran 5. Diagram alir uji aktivitas antibakteri Dipipet 0,1 mL bakteri uji kemudian dituang ke dalam cawan petri steril dan ditambahkan 15-20 ml NA cair, dibiarkan memadat Kertas cakram direndam dalam ekstrakdengan konsentrasi50%; 25%; 12,5%; 6,25%; 3%; 1,5%; 0,5% Kertas cakram dihilangkan ekses/kelebihan airnya Kertas cakram diletakkan dalam cawan yang berisi media dan bakteri uji Cawan petri diinkubasi pada suhu 37oC selama 24jam Diameter zona bening yang terbentuk diamati dan diukur
Lampiran 6. Hasil uji aktivitas antibakteri Aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat daun sirih merah konsentrasi 50% terhadap bakteri B.cereus
Fase adaptasi
Fase eksponensial
Fase stasioner
71
Aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat daun sirih merah konsentrasi 50% terhadap bakteri S.flexneri
Fase adaptasi
Fase eksponensial
Fase stasioner
Aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat daun sirih merah konsentrasi 25% terhadap bakteri B.cereus
Fase adaptasi
Fase eksponensial
Fase stasioner
Aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat daun sirih merah konsentrasi 25% terhadap bakteri S.flexneri
Fase adaptasi
Fase eksponensial
Fase stasioner
72
Aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat daun sirih merah konsentrasi 12,5% terhadap bakteri B.cereus
Fase adaptasi
Fase eksponensial
Fase stasioner
Aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat daun sirih merah konsentrasi 12,5% terhadap bakteri S.flexneri
Fase adaptasi
Fase eksponensial
Fase stasioner
Aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat daun sirih merah konsentrasi 6,25% terhadap bakteri S.flexneri
Fase adaptasi
Fase eksponensial
Fase stasioner
73
Aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat daun sirih merah terhadap bakteri S.flexneri pada fase eksponensial
Konsentrasi 1,5%
Konsentrasi 3%
Aktivitas antibakteri pelarut etilasetat terhadap bakteri B.cereus
B.cereus ATCC 14745
S.flexneri ATCC 12022
Aktivitas antibakteri pelarut etanol terhadap bakteri B.cereus
B.cereus ATCC 14745
S.flexneri ATCC 12022
74
Aktivitas antibakteri antibiotik (Amoxcillin) terhadap bakteri B.cereus
Fase adaptasi
Fase eksponensial
Fase stasioner
Aktivitas antibakteri antibiotik (Amoxcillin) terhadap bakteri S.flexneri
Fase stasioner
Fase eksponensial
Fase adaptasi
Lampiran 7. Perhitungan diameter zona hambat (Beker et al., 1991 dalam Trijani, 2012) C c
A Kertas cakram
a
b
d
B Zona hambat
D Pengukuran jari-jari: Pengukuran I : (AB-ab) : 2 Pengukuran II : (CD-cd) : 2 Zona Hambat : Pengukuran I + II 2 Pengukuran diameter: Pengukuran jari-jari x 2
75
Lampiran 8. Diagram alir uji kebocoran sel 10 mL suspensi bakteri
Disentrifugasi 3500 rpm selama 20 menit
Supernatan dibuang
Pelet sel disuspensikan dalam 5 mL NaCl 0,85%
Ditambah ekstrak etilasetat
Tanpa ekstrak
Dishaker 120 rpm selama 24 jam
Disentrifugasi 10.000 rpm selama 10 menit
Cairan supernatan
Pelet bakteri
Diukur dengan spektrofotometer UV pada panjang gelombang 260 nm dan 280 nm
Lampiran 9.Gambar alat dan bahan
Sirih merah kering
Serbuk sirih merah
Sirih merah hasil maserasi
76
Evaporator
B.cereus ATCC 14745
S.flexneri ATCC 12022
