AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI N-HEKSAN, KLOROFORM, DAN ETANOL DARI EKSTRAK ETANOL DAUN RAMBUTAN

AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI N-HEKSAN, KLOROFORM, DAN ETANOL DARI EKSTRAK ETANOL DAUN RAMBUTAN (Nephelium lappaceum, L.) TERHADAP BAKTERI Escherichia coli

KARYA TULIS ILMIAH

OLEH SITI ALFIANINGSIH NIM 13.043

AKADEMI ANALIS FARMASI DAN MAKANAN PUTRA INDONESIA MALANG AGUSTUS 2016


KARYA TULIS ILMIAH

Diajukan kepada Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang Dalam menyelesaikan program D-3 Bidang Analis Farmasi dan Makanan

OLEH SITI ALFIANINGSIH NIM 13.043

AKADEMI ANALIS FARMASI DAN MAKANAN PUTRA INDONESIA MALANG AGUSTUS 2016

PERNYATAAN ORSINILITAS KARYA TULIS ILMIAH

Saya menyatakan dengan sebenar – benarnya bahwa sepanjang pengetahuan saya, NAMA

: SITI ALFIANINGSIH

NIM

: 13.043

didalam Naskah Karya Tulis Ilmiah ini tidak terdapat karya tulis ilmiah yang pernah diajukan oleh orang lain untuk memperoleh gelar akademik di suatu Pergururan Tinggi, dan tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain dan disebutkan dalam sumber kutipan dan pustaka.

Apabila ternyata didalam naskah KTI ini dapat dibuktikan terdapat unsur – unsur PLAGIASI, saya bersedia KTI ini digugurkan dan gelar akademik yang telah saya peroleh (A.Md.,Si) dibatalkan, serta diproses sesuai dengan peraturan perundang – undangan yang berlaku. (UU NO 20 Tahun 2003, Pasal 25 ayat 2 dan pasal 70)

Malang, 2 Juli 2016

Siti Alfianingsih


ABSTRAK Ekstrak etanol daun rambutan mengandung tanin, saponin, steroid, flavonoid, alkaloid, dan terpenoid. Senyawa metabolit sekunder dari ekstrak tersebut perlu difraksinasi berdasarkan tingkat kepolaran untuk mengetahui aktivitas antibakteri dari fraksi aktif tersebut dan untuk mengetahui manakah fraksi yang paling aktif dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli. Ekstrak etanol daun rambutan difraksinasi dengan menggunakan pelarut n-heksan, kloroform dan etanol 70%. Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode difusi cakram, dengan Tetrasiklin dan DMSO sebagai kontrol. Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ketiga fraksi menghasilkan zona hambat. Hasil analisa data menunjukkan bahwa fraksi etanol memiliki perbedaan yang signifikan terhadap kontrol DMSO, fraksi n – heksan, kloroform, akan tetapi tidak memiliki perbedaan yang signifikan terhadap kontrol tetrasiklin. Sedangkan fraksi n – heksan dengan kloroform tidak memberikan perbedaan yang signifikan diantara keduanya akan tetapi memberikan perbedaan yang signifikan terhadap kontrol tetrasiklin, DMSO, dan fraksi etanol. Hal tersebut membuktikan bahwa fraksi n – heksan, kloroform dan etanol memberikan aktifitas antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli dengan fraksi yang paling aktif adalah fraksi etanol. Berdasarkan hasil penelitian, sebaiknya perlu diberikan kontrol pelarut fraksinasi pada saat pengujian aktivitas antibakteri, dan dilakukan penggunaan pelarut lain dalam proses fraksinasi.

Kata Kunci: Antibakteri, fraksi n –heksan, fraksi kloroform, fraksi etanol, ekstrak etanol daun rambutan.

i

ANTIBACTERIAL ACTIVITY N-HEXAN, CHLOROFORM, AND ETHANOL FROM RAMBUTAN LEAF (Nephelium lappaceum, L.) ETHANOL EXTRACT TO Escherichia coli BACTERIA

ABSTRACT Rambutan leaves ethanol extract contained steroids, terpenoids, alkaloids, saponins, flavonoids, and tannins. Those secondary metabolites needed to do fractionation based on different polarity to knowing antibacterial activity of active fraction and to knowing which one of that fraction who has activity more. Rambutan leaves ethanol extract was fractionated with n – hexane, chloroform, and ethanol solvent. The antibacterial activity was identified using disk diffusion method with tetracycline and DMSO as control. Result of antibacterial activity was showed that active fraction giving clear zone. Result of data analyses was showed that ethanol fraction has significant different activity with DMSO as control, n – hexane fraction and chloroform fraction, but hasn’t significant different activity with tetracycline control. While the n – hexane fraction with chloroform fraction hasn’t significant different activity but has significant different activity with ethanol fraction, DMSO, and tetracycline as control. That result showed that n – hexane, chloroform, and ethanol fraction was giving antibacterial activity to Escherichia coli with ethanol fraction that has maximum activity. Based on that result, was better if using solvent control, and needed to used another solvent to fractionation. Key word: Antibacterial, n – hexane fraction, chloroform fraction, ethanol fraction, rambutan leaves ethanol extract

ii

KATA PENGANTAR Puji Syukur ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah melimpahkan rahmat dan karuinia-Nya sehingga penulis dapat menyeleseikan Karya Tulis Ilmiah yang berjudul ”Aktivitas Antibakteri Fraksi Aktif Esktrak Etanol Daun Rambutan (Nephelium lappaceum L. Folium) terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli” ini tepat pada waktunya. Tujuan penulisan karya tulis ilmiah ini sebagai persyaratan untuk menyelesaikan program D-3 di Akadem Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang. Sehubungan dengan terselesaikannya karya tulis ilmiah ini, saya mengucapkan terimakasih kepada pihak – pihak sebagai berikut. 1. Dra. Wigang Solandjari, selaku Direktur Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang. 2. Dr. Misgiati, A.Md., M.Pd., selaku dosen pembimbing. 3. Dr. Sentot Joko Raharjo, M.Si., selaku penguji. 4. Bapak dan Ibu Dosen Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang. 5. Orang tua yang telah memberikan dorongan secara spiritual materil restunya dalam menuntut ilmu. 6. Rekan – rekan mahasiswa dan semua pihak yang langsung maupun tidak langsung telah memberikan bimbingan, bantuan, serta arahan kepada penulis. Penulis menyadari bahwa Karya Tulis Ilmiah ini masih mempunyai beberapa kekurangan. Oleh karena itu, saran – saran akan sangan diharapkan. Semoga Karya Tulis Ilmiah ini bermanfaat.

Malang, 2 Juli 2016

Penulis

iii

DAFTAR ISI

ABSTRAK........................................................................................................... i ABSTRACT ....................................................................................................... ii KATA PENGANTAR ....................................................................................... iii DAFTAR ISI ..................................................................................................... iv DAFTAR TABEL ............................................................................................. ix DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... x DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xi DAFTAR SINGKATAN ................................................................................. xiii BAB I PENDAHULUAN ................................................................................... 1 1.1

Latar Belakang ..................................................................... 1

1.2

Rumusan Masalah ................................................................ 6

1.3

Tujuan Penelitian ................................................................. 6

1.4

Ruang Lingkup dan Keterbatasan Penelitian ........................ 6

1.5

Definisi Istilah ..................................................................... 7

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................ 8 2.1

Tanaman Rambutan ............................................................. 8

2.1.1

Morfologi............................................................................. 8

2.1.3

Taksonomi ........................................................................... 9

2.1.4

Manfaat.............................................................................. 10

2.1.5

Kandungan Kimia .............................................................. 10

2.1.5.1

Saponin .............................................................................. 10

2.1.5.2

Tanin ................................................................................. 13

iv

2.1.5.3

Flavonoid ........................................................................... 16

2.1.5.4

Alkaloid ............................................................................. 17

2.1.5.5

Steroid dan Terpenoid ........................................................ 18

2.2

Ekstraksi ............................................................................ 19

2.2.1

Ektraksi Tunggal ................................................................ 20

2.2.1.1

Maserasi............................................................................. 20

2.2.2

Ekstraksi Bertingkat ........................................................... 21

2.2.3

Pelarut ............................................................................... 22

2.2.3.1

n-Heksan............................................................................ 25

2.2.3.2

Kloroform .......................................................................... 26

2.3

Bakteri ............................................................................... 27

2.3.1

Struktur Bakteri ................................................................. 27

2.3.2

Bakteri Penyebab Diare ...................................................... 31

2.3.2.1

Escherichia coli ................................................................. 31

2.3.2.1.1

Klasifikasi .......................................................................... 32

2.3.2.1.2

Media pertumbuhan E.coli ................................................. 32

2.3.3

Senyawa Antibakteri .......................................................... 33

2.3.3.1

Mekanisme kerja Antibakteri ............................................. 34

2.3.3.2

Faktor – faktor yang Mempengaruhi Kerja Antibakteri ...... 35

2.4

Metode Difusi .................................................................... 36

2.4.1

Cara Cakram (disc) ............................................................ 37

2.4.2

Cara Parit (ditsh) ................................................................ 37

2.4.3

Cara Sumur (cup) ............................................................... 37

2.5

Kerangka Konsep ............................................................... 38

v

2.6

Hipotesis ............................................................................ 40

BAB III METODE PENELITIAN .................................................................. 41 3.1

Rancangan Penelitian ......................................................... 41

3.2

Populasi dan Sampel .......................................................... 42

3.2.1

Populasi ............................................................................. 42

3.2.2

Sampel ............................................................................... 42

3.3

Lokasi dan Waktu Penelitian .............................................. 42

3.3.1

Lokasi ................................................................................ 42

3.3.2

Waktu Penelitian ................................................................ 42

3.4

Definisi Operasional daan Variabel .................................... 42

3.5

Alat dan Bahan .................................................................. 43

3.5.1

Alat .................................................................................... 43

3.5.2

Bahan................................................................................. 44

3.6

Prosedur Penelitian ............................................................ 44

3.6.1

Determinasi Tanaman ........................................................ 44

3.6.2

Proses Ekstraksi Daun Rambutan ....................................... 44

3.6.3

Proses Fraksinasi................................................................ 45

3.6.4

Skrining Fitokimia ............................................................. 45

3.6.4.1

Uji Alkaloid ....................................................................... 45

3.6.4.1.1

Uji Tabung ......................................................................... 45

3.6.4.1.2

Metode KLT ...................................................................... 46

3.6.4.2

Uji Flavonoid ..................................................................... 46

3.6.4.2.1

Uji Tabung ......................................................................... 46

3.6.4.2.2

Metode KLT ...................................................................... 46

vi

3.6.4.3

Uji Terpenoid dan Steroid .................................................. 46

3.6.4.3.1

Uji Tabung ......................................................................... 46

3.6.4.3.2

Metode KLT ...................................................................... 47

3.6.4.4

Uji Saponin ........................................................................ 47

3.6.4.4.1

Uji Tabung ......................................................................... 47

3.6.4.4.2

Metode KLT ...................................................................... 47

3.6.4.5

Uji Tannin .......................................................................... 47

3.6.4.5.1

Uji Tabung ......................................................................... 47

3.6.4.5.2

Metode KLT ...................................................................... 47

3.6.5

Pengujian Aktivitas Antibakteri dengan Metode Difusi Cakram .............................................................................. 48

3.6.5.1

Pembiakan Bakteri Uji ....................................................... 48

3.6.5.2

Identifikasi Bakteri Escherichia coli................................... 48

3.6.5.3

Pembuatan Suspensi bakteri ............................................... 48

3.6.5.4

Pembuatan Cakram Uji ...................................................... 48

3.6.5.5

Pengujian ........................................................................... 49

3.6.6

Analisis Data...................................................................... 49

BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN .................................. 50 4.1

Hasil Determinasi Tanaman Rambutan .............................. 50

4.2

Hasil Pembuatan Simplisia ................................................. 50

4.3

Hasil Ekstraksi Daun Rambutan ......................................... 51

4.4

Hasil Fraksinasi Ekstrak Daun Rambutan ........................... 52

4.5

Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak dan hasil Fraksinasi Ektrak Daun Rambutan ................................................................. 54

vii

4.6

Hasil Pembiakan Pembuatan Suspensi bakteri Escherichia coli..................................................................................... 56

4.7

Identifikasi Bakteri Escherichia coli................................... 57

4.8

Hasil Persiapan Cakram Uji ............................................... 58

4.9

Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri ................................ 59

BAB V PENUTUP............................................................................................ 64 5.1

Kesimpulan ........................................................................ 64

5.2

Saran.................................................................................. 64

DAFTAR RUJUKAN ...................................................................................... 69 LAMPIRAN ..................................................................................................... 75

viii

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Konstanta Dielektrikum Bahan Pelarut ...............................................16 Tabel 3.1 Definisi Operasional Variabel .............................................................32 Tabel 4.1 Hasil pemeriksaan Karakteristik Ekstrak Etanol Daun Rambutan ....... 52 Tabel 4.2 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Fraksi n-Heksan, Kloroform dan Etanol Dari Ekstrak Etanol Daun Rambutan ....................................... 53 Tabel 4.3 Hasil Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder Fraksi n-Heksan, Kloroform dan Etanol dari Ekstrak Etanol Daun Rambutan ................ 54 Tabel 4.4 Hasil Pengamatan Aktivitas Antibakteri Fraksi Aktif Daun Rambutan terhadap bakteri Escherichia coli ....................................................... 59

ix

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Struktur Saponin ............................................................................. 10 Gambar 2.2 Interaksi antara Bahan Antibakteri yang memiliki Gugus Hidrofobik dan Hidrofilik dengan Dinding Sel Bakteri ...................................... 11 Gambar 2.3 Struktur Tanin ................................................................................. 13 Gambar 2.4 Ikatan Hidrogen yang Terbentuk antara Tannin dengan Protein ...... 13 Gambar 2.5 Hasil dari SEM Morfologi dari Sel Normal E. coli .......................... 14 Gambar 2.6 Hasil dari SEM morfologi dari sel bakteri E.coli yang diberi ekstrak tannin dari daun Jambu Biji ............................................................. 14 Gambar 2.7 Reaksi antara Tanin dengan FeCl3 ................................................... 15 Gambar 2.8 Reaksi Penguraian Fosfolipida pada Membran Sitoplasma Bakteri oleh Flavon ...................................................................................... 16 Gambar 2.9 Struktur Alkaloid ............................................................................ 17 Gambar 2.10 Struktur Dasar Steroid ................................................................... 18 Gambar 2.11 Diagram Skematik Dinding Sel Bakteri Gram positif dan Gram negatif ............................................................................................. 28

x

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Pemilihan Daun Muda .................................................................... 75 Lampiran 2. Hasil Determinasi tanaman Rambutan (Nephelium lappaceum L.).. 75 Lampiran 3. Proses Pembuatan Simplisia ........................................................... 76 Lampiran 4 Pembuatan Serbuk Simplisia Daun Rambutan ................................. 76 Lampiran 5. Penimbangan Serbuk Simplisia untuk Proses Maserasi ................... 76 Lampiran 6. Proses Maserasi.............................................................................. 76 Lampiran 7. Penyaringan Hasil Maserasi ........................................................... 77 Lampiran 8. Rendemen Ekstrak Daun Rambutan ............................................... 77 Lampiran 9. Proses Penguapan Etanol dari Maserat menggunakan Rotary Evaporator ..................................................................................... 77 Lampiran 10. Proses Pengentalan Ekstrak menggunakan Waterbath................... 77 Lampiran 11. Proses Fraksinasi Ekstrak ............................................................. 78 Lampiran 12. Perhitungan Rendemen tiap Fraksi ............................................... 79 Lampiran 13. Hasil Uji Kualitatif Ekstrak dan Fraksi Aktif Daun Rambutan ...... 79 Lampiran 14. Pembiakan dan Isolasi Bakteri ...................................................... 83 Lampiran 15. Pembuatan Suspensi Bakteri......................................................... 83 Lampiran 16. Hasil Identifikasi Bakteri .............................................................. 83 Lampiran 17. Hasil Perhitungan Dosis 10 g untuk Larutan Uji ........................... 84 Lampiran 18. Penimbangan Bahan untuk Larutan Uji ........................................ 84 Lampiran 19. Perendaman Kertas Cakram pada Larutan Uji .............................. 84 Lampiran 20. Proses Pengujian Aktivitas Antibakteri ......................................... 84 Lampiran 21. Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri........................................... 85

xi

Lampiran 22. Hasil Analisis Data One Way Anova ............................................ 86

xii

DAFTAR SINGKATAN

KBM

Konsentrasi Bunuh Minimum

KHM

Konsentrasi Hambat Minimum

KLT

Kromatografi Lapis Tipis

DMSO

Dimetil Sulfooksida

E.coli

Escherichia coli

EMBA

Eosin Methylen Blue Agar

SEM

Scanning Electron Microscope

xiii

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Kebersihan adalah salah satu gaya hidup yang harus dijaga. Kebersihan sangatlah berpengaruh terhadap kesehatan. Kebersihan dapat digolongkan menjadi kebersihan diri dan kebersihan lingkungan. Kebersihan diri adalah kebersihan yang menyangkut pada diri sendiri baik kebersihan secara fisik maupun mental. Sedangkan kebersihan lingkungan adalah kebersihan yang menyangkut pada lingkungan sekitar. Salah satu contoh dari kebersihan lingkungan adalah dengan tersedianya sumber air bersih, taman yang bersih dan indah, bebas dari sampah yang tidak dibuang pada tempatnya, dan lain – lain. Lingkungan yang kurang bersih ataupun kebiasaan buruk yang dapat mencemari lingkungan, akan menimbulkan penyakit yang menyerang masyarakat baik secara langsung ataupun tidak langsung yaitu melalui perantara. Contoh dari penyakit yang disebabkan karena kurang bersihnya suatu lingkungan adalah penyakit demam berdarah, muntaber, diare, dan lain – lain. Diare merupakan salah satu penyakit endemik di Indonesia. Hasil Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas) (2013) menyatakan, angka prevalensi nasional untuk peningkatan diare tiap tahunnya adalah sebesar 3,5%. Diare terkadang dipandang sebagai penyakit sepele yang sering menjangkit anak-anak bahkan orang dewasa. Padahal penyakit ini dapat menjadi masalah yang berat jika tidak ditangani dengan serius. Diare terdiri dari dua macam jenis antara lain adalah diare akut dan diare kronis. Diare kronik adalah diare yang berlangsung lebih dari tiga minggu

1

2

untuk orang dewasa dan dua minggu batas waktu pada bayi dan anak. Diare ini disebabkan oleh beberapa faktor antara lain adalah adanya kerusakan dan kematian enterosit yang disertai peradangan dan feses berdarah. Diare akut adalah diare yang awalnya mendadak dan berlangsung singkat, dalam beberapa jam sampai 7 atau 14 hari. Penyebab utama diare akut adalah infeksi baik oleh bakteri, parasit maupun virus. (Vernanda, et al, 2015) Escherichia coli merupakan bakteri utama penyebab diare. Penelitian yang dilakukan oleh Nweze di Nigeria menemukan bahwa diare terbanyak pada balita adalah disebabkan oleh bakteri Escherichia coli yakni sebesar 28,08% dan diikuti oleh Salmonella sp. sebanyak 5,6%. Escherichia coli adalah bakteri Gram negatif berbentuk batang pendek yang memiliki panjang sekitar 2 μm, diameter 0,7 μm, lebar 0,4-0,7μm dan bersifat anaerob fakultatif. Eschericia coli adalah anggota flora normal usus. Eschericia coli berperan penting dalam sintesis vitamin K, konversi pigmen-pigmen empedu, asam-asam empedu dan penyerapan zat-zat makanan. Eschericia coli menjadi patogen jika masuk ke dalam mukosa dan memperbanyak diri, menghasilkan toksin yang selanjutnya diserap oleh darah dan menimbulkan penyakit

diare. Supaya tidak

mengakibatkan diare yang

berkepanjangan (lebih dari 14 hari) dan tidak menimbulkan efek yang lebih fatal, maka penyakit ini harus segera diobati. (Jawetz, et al, 1995; Darwis, et al, 2013) Obat berdasarkan jenis bahannya digolongkan menjadi dua antara lain adalah obat sintetis dan obat herbal. Obat sintetis adalah obat yang mengandung bahan - bahan kimia atau sintetis, sedangkan obat herbal adalah obat yang mengandung bahan – bahan alam. Segala sesuatu memiliki kekurangan dan kelebihan. Kelebihan dari obat sintetis adalah telah melalui pengujian ilmiah,

3

dosis sudah diketahui, lebih stabil dan memiliki efek farmakologi yang besar. Sedangkan kekurangnnya adalah kurang efektif untuk penyakit kronis, efek samping lebih sering terjadi. Kelebihan dari obat herbal diantaranya adalah efek sampingnya relatif kecil jika digunakan secara tepat, komponen dalam suatu bahan memiliki efek saling mendukung, pada satu tanaman obat memliki efek farmakologi, lebih sesuai untuk penyakit – penyakit metabolik degeneratif. Sedangkan kekurangan dari obat herbal antara lain adalah masih belum terbukti ilmiah, standar atau bahan baku sering berubah dalam takaran maupun ramuannya, efek farmakologisnya lemah, pemasaran tidak seketat obat sintetik yang menyebabkan kualitas dari obat herbal di pasaran belum tentu baik. Namun demikian, secara umum masyarakat kini lebih memilih menggunakan bahan alami untuk mengatasi masalah kesehatan. Bahan – bahan alam yang biasa digunakan untuk mengatasi masalah diare dalam masyarakat adalah, jambu biji, daun salam, daun awar – awar, daun rambutan, dan lain – lain. (Katno, 2008) Salah satu penelitian yang dilakukan, termasuk oleh Rahayu (2012) telah diketahui bahwa ekstrak kental dari hasil meserasi daun rambutan yang masih muda memiliki aktivitas menghambat dan membunuh bakteri Escherichia coli pada dosis 10 gram simplisa. Daun rambutan merupakan daun yang biasa dijumpai pada pekarangan rumah. Daun rambutan memiliki jumlah yang yang melimpah dibandingkan bagian tanaman rambutan lainnya dan jarang dimanfaatkan. Menurut Hariana (2006) daun rambutan mengandung senyawa metabolit sekunder, yaitu tannin dan saponin. Untuk mengambil senyawa tersebut maka

4

dilakukan proses ekstraksi. Akan tetapi dalam proses ekstraksi tersebut tidak menutup kemungkinan terdapat senyawa lain yang terkandung dalam daun rambutan yang juga terkandung dalam bagian rambutan lainnya. Seperti halnya kandungan senyawa steroid, terpenoid, dan alkaloid yang terkandung dalam kulit buah rambutan, dan kandungan senyawa flavonoid yang terkandung dalam biji dan kulit batang rambutan. Senyawa – senyawa tersebut memiliki kemampuan sebagai senyawa antibakteri. Tanin, saponin dan flavonoid dapat berfungsi sebagai antibakteri dengan cara mendenaturasi protein yang terdapat dalam dinding sel bakteri dengan membentuk ikatan hidrogen sehingga sel bakteri menjadi lisis. Sedangkan alkaloid dapat berfungsi sebagai antibakteri dengan adanya gugus basa didalamnya yang apabila mengalami kontak dengan bakteri akan bereaksi dengan senyawa - senyawa asam amino yang menyusun dinding sel bakteri sehingga dapat menyebabkan sel bakteri menjadi lisis. Steroid dan terpenoid dapat berfungsi sebagai antibakteri dengan sifatnya yang mudah larut dalam lipid mengakibatkan senyawa ini lebih mudah menembus dinding sel bakteri Gram positif dan sel bakteri Gram negatif. Kemampuan senyawa – senyawa tersebut sebagai antibakteri, perlu dilakukan fraksinasi berdasarkan tingkat kepolarannya untuk mengatahui fraksi manakah yang paling optimum dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli. Fraksinasi dilakukan dengan metode ekstraksi cair-cair. Metode ekstraksi cair-cair dipilih karena untuk memudahkan pemisahan selanjutnya sesuai dengan prinsip like dissolves like. Pelarut yang bersifat polar akan menarik senyawa yang bersifat polar. Contoh dari pelarut polar adalah air dan asam

5

formiat. Pelarut semipolar akan menarik senyawa yang bersifat semi polar. Contoh dari pelarut semi polar adalah kloroform, butil asetat, dan asam asetat. Sedangkan pelarut nonpolar akan menarik senyawa yang bersifat non polar. Contoh dari pelarut nonpolar adalah n - heksan, petroleum eter, dan n-oktan. Berturut-turut pelarut yang digunakan untuk memfraksi senyawa aktif dalam ekstrak daun rambutan adalah pelarut n-heksan, kloroform, dan etanol. (Wijaya, et al., 2013) Pelarut n – heksan yang bersifat non polar dimungkinkan akan menarik senyawa steroid dan terpenoid yang juga bersifat non polar. Pelarut kloroform yang bersifat semi polar dimungkinkan akan menarik senyawa alkaloid yang juga bersifat semi polar. Dan sisanya yaitu pelarut etanol dimungkinkan mengandung senyawa tanin, saponin, dan flavonoid. Ketiga fraksi tersebut yang berpotensi sebagai fraksi yang paling aktif sebagai antibakteri Escherichia coli adalah fraksi etanol, karena dalam fraksi tersebut mengandung senyawa yang diketahui secara pasti terdapat dalam daun rambutan. Untuk membuktikan hal tersebut maka perlu dilakukan pengujian. Pengujian yang dilakukan meliputi skrining fitokimia dan uji aktivitas antibakteri. Pengujian skrining fitokimia digunakan untuk mengetahui masing – masing golongan senyawa kimia yang terkandung dalam ekstrak dan fraksi. Skrining Fitokimia dilakukan dengan menggunakan uji tabung dan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Sedangkan uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode difusi cakram. Pengujian aktivitas antibakteri dengan metode ini dilakukan dengan mengukur diameter zona bening (clear zone) yang merupakan petunjuk

6

adanya penghambatan atau pembunuhan bakteri oleh suatu senyawa antibakteri dalam fraksi.

1.2 Rumusan Masalah 1. Bagaimanakah aktivitas antibakteri fraksi n – heksan, kloroform, dan etanol dari ekstrak daun rambuatan (Nephelium lappaceum, L. Folium) terhadap bakteri Eschericia coli ? 2. Manakah fraksi ekstrak daun rambuatan (Nephelium lappaceum, L. Folium) yang memiliki aktivitas paling maksimum sebagai antibakteri Eschericia coli?

1.3 Tujuan Penelitian 1. Untuk mengetahui aktivitas antibakteri fraksi – heksan, kloroform, dan etanol dari ekstrak daun rambuatan (Nephelium lappaceum, L. Folium) terhadap bakteri Eschericia coli 2. Untuk mengetahui fraksi ekstrak daun rambuatan (Nephelium lappaceum, L. Folium) manakah yang memiliki aktivitas paling maksimum sebagai antibakteri Eschericia coli

1.4 Ruang Lingkup dan Keterbatasan Penelitian Ruang lingkup pada penelititan ini adalah pengujian aktivitas antibakteri fraksi – heksan, kloroform, dan etanol dari ekstrak daun rambuatan (Nephelium lappaceum, L. Folium) terhadap bakteri Eschericia coli menggunakan metode cakram untuk menentukan besar diameter zona hambat dari fraksi – heksan,

7

kloroform, dan etanol terhadap bakteri E.coli. Ekstrak daun rambutan diperoleh dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol 70% kemudian di fraksinasi menggunakan pelarut n-heksan, kloroform, dan etanol. Keterbatasan dari penelitian ini antara lain adalah sebgai berikut : 1. Penelitian ini hanya menggunakan satu bakteri, yaitu Escherichia coli 2. Penelitian tidak dilakukan replikasi

1.5 Definisi Istilah 1. Ekstrak daun rambutan adalah sediaan cair yang diperoleh melaui penyarian (ekstraksi) daun rambutan yang masih muda dengan menggunakan pelarut yang sesuai yaitu etanol dengan cara maserasi. 2. Fraksi adalah sediaan cair hasil partisi dari ekstrak daun rambutan dengan menggunakan pelarut n – heksan, kloroform, dan etanol. 3. Aktivitas antibakteri adalah kemampuan suatu zat dalam menghambat atau membunuh bakteri. 4. Diare adalah suatu penyakit dimana seseorang menderita buang air besar berkali – kali yaitu lebih dari tiga kali sehari dari dengan konsistensi tinja lebih lembek atau cair. 5. Escherichia coli merupakan salah satu bakteri penyebab diare. 6. Difusi cakram adalah suatu metode yang dapat digunakan untuk mengetahui aktivitas antibakteri yang ditunjukkan dengan besarnya diameter zona hambat

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tanaman Rambutan Rambutan dikenal dengan berbagai macam nama lokal di Indonesia seperti rambutan, rambot, rambut, rambuteun, rambuta, jailan, folui, bairabit, puru biancak, p. Biawak, hahujam, kakapas, likis, takujung alu (Sumatera), rambutan, corogol,

tundun,

bunglon,

buwa,

buluwan

(Jawa),

buluan,

rambuta

(NusaTenggara), rambutan, siban, banamon, beriti, sanggalaong, sagalong, beliti, maliti, kayokan, bengayau, puson (Kalimantan), rambutan, rambuta, rambusa, barangkasa, bolangat, balatu, balatung, walatu, wayatu, wilatu, wulangas, lelamu, lelamun, toleang (Sulawesi), rambutan, rambuta (Maluku) (Dalimartha, 2005)

2.1.1 Morfologi Rambutan banyak ditanam sebagai pohon buah dan kadang-kadang ditemukan tumbuh liar. Tumbuhan tropis ini memerlukan iklim lembab dengan curah hujan tahunan paling sedikit 2000 mm. Rambutan merupakan tanaman dataran rendah yang ketinggiannya mencapai 300-600 m dpl. Pohon dengan tinggi 15-25 m ini mempunyai banyak cabang. Daunnya merupakan daun majemuk menyirip yang letaknya berseling dengan anak daun 2-4 pasang. Helaian anak daun berbentuk bulat lonjong dengan panjang 7,5-20 cm dan lebar 3,5-8,5 cm, ujung dan pangkal daunnya runcing, tepi rata, pertulangan menyirip, tangkai silindris, warnanya hijau dan seringkali mengering. (Dalimartha, 2005)

8

9

Bunga tersusun pada tandan di ujung ranting, harum, kecil-kecil dan berwarna hijau muda. Bunga jantan dan bunga betina tumbuh terpisah dalam satu pohon. Buah berbentuk bulat lonjong yang mempunyai panjang 4-5 cm dengan duri tempel yang bengkok, lemas sampai kaku. Kulit buahnya berwarna hijau dan menjadi kuning atau merah kalau sudah masak. Dinding buah tebal. Biji berbentuk elips, terbungkus daging buah berwarna putih transparan yang dapat dimakan dan banyak mengandung air, rasanya bervariasi dari masam sampai manis. Kulit biji tipis berkayu. (Dalimartha, 2005) 2.1.2 Determinasi Tanaman Determinasi tanaman dapat dilakukan dengan melihat morfologi dari tanaman dan membandingkannya dengan literatur. Berikut adalah hasil determinasi tanaman rambutan yang telah dilakukan oleh Saleh, dkk. (2015) adalah 1b, 2b, 3b, 4b, 6b, 7b, 9b, 10b, 11b, 12b, 13b, 14a, 15b, 197b, 208b, 219b, 220a, 221b, 222a Family Sapindaceae.1b, 5a Genus Naphelium. Naphelium lappaceum. 2.1.3 Taksonomi Dunia

: Plantae

Divisi

: Magnoliophyta

Kelas

: Magnoliopsida

Subkelas

: Rosidae

Bangsa

: Sapindales

Suku

: Sapindaceae

Marga

: Nephelium

Jenis

: Nephelium lappaceum, L. (Cronquist, 1981)

10

2.1.4 Manfaat Akar, biji, daun, dan kulit buah dari tanaman daun rambutan dapat dimanfaatkan sebagai bahan obat. Bagian akar rambutan bermanfaat sebagai antidiabetes. Biji rambutan dapat digunakan untuk mengobati kencing manis. Kulit rambutan dapat digunakan untuk mengatasi demam. Sedangkan bagian daunnya dapat digunakan untuk sebagai penghitam rambut beruban serta sebagai senyawa antibakteri. (Hariana, 2006) 2.1.5 Kandungan Kimia Rambutan kaya kandungan kimia seperti zat besi, kalsium, karbohidrat, fosfor, lemak, protein, dan vitamin C. Biji mengandung lemak dan polifenol. Kulit batang terdapat flavonoid, pectic subtance, saponin. Pada Kulit buah mengandung steroid, terpenoid, dan alkaloid (Tjandra, dkk., 2015). Sementara pada daun mengandung senyawa saponin, dan tannin. (Hariana, 2006)

2.1.5.1 Saponin

Gambar 2.1 Struktur Saponin (Hostettmann, et al., 1995)

11

Saponin adalah senyawa aktif yang bersifat seperti sabun. Senyawa ini dapat dideteksi karena kemampuannya membentuk busa dan menghemolisis darah (Harbone, 1987). Saponin merupakan senyawa yang dapat larut dalam air. Mekanisme kerja saponin sebagai antibakteri yaitu dengan mendenaturasi protein sel. Ikatan hidrogen yang terbentuk antara gugus fenol dan protein mengakibatkan struktur protein menjadi rusak. Ikatan hidrogen tersebut akan mempengaruhi permeabilitas dinding sel dan membran sitoplasma sebab keduanya tersusun atas protein. Permeabilitas dinding sel dan membran sitoplasma yang terganggu dapat menyebabkan ketidakseimbangan makromolekul dan ion dalam sel, sehingga sel menjadi lisis. (Rijayanti, 2014) Menurut Rohmanto, dkk. (2014) saponin dapat menghambat atau membunuh bakteri dengan cara menurunkan tegangan permukaan pada permukaan dinding sel. Kemampuan dalam menurunkan tegangan permukaan ini disebabkan karena saponin memiliki sifat ganda dari molekulnya, yaitu sifat polar (gugus hidrofilik) pada aglikon dan sifat non polar (gugus hidrofobik) pada glikon. Gugus hidrofobik yaitu glikon dari saponin akan larut dengan gugus hidrofobik yang terdapat dalam dinding sel bakteri.

Gambar 2.2 Interaksi antara Bahan Antibakteri yang memiliki Gugus Hidrofobik dan Hidrofilik dengan Dinding Sel Bakteri (Brooks, et al., 1986)

12

Pada prinsipnya jika interaksi dengan fasa minyak lebih kuat dibandingkan dengan fasa air dan jumlah gugus hidrofobik yang lebih dominan, maka akan mengakibatkan tegangan permukaan minyak menjadi lebih rendah (Tang, dkk., 2011). Turunnya tegangan permukaan tersebut mengakibatkan kerusakan pada dinding sel, sehingga membran sel tidak mempunyai pelindung. Kerusakan pada membran sel menyebabkan hilangnya sifat semi permeabilitas membran sel, sehingga keluar-masuknya zat-zat seperti air, enzim-enzim tidak terseleksi. Hal ini mengakibatkan metabolisme sel terganggu, sehingga proses pembentukan ATP untuk pertumbuhan sel terhambat, jika proses ini berlanjut maka akan menimbulkan kematian sel. (Rohmanto, dkk., 2014) Saponin dapat diidentifikasi secara kualitatif menggunakan reaksi tabung dan metode Kromatografi lapis tipis. Reaksi tabung yang dilakukan adalah dengan menambahkan air dan dikocok sehingga menimbulkan busa yang stabil selama 10 menit. Pembuktian busa yang terbentuk merupakan saponin dilakukan dengan penambahan HCl 2N, apabila busa tetap ada berarti busa merupakan saponin, jika hilang setelah penambahan HCl 2N maka busa tersebut merupakan protein (Farnsworth, 1996). Timbulnya busa pada uji saponin menunjukkan adanya glikosida yang mempunyai kemampuan untuk membentuk buih dalam air yang terhidrolisis menjadi glukosa dan senyawa lainnya. (Astaria 2013). Identifikasi dengan

menggunakan metode KLT, digunakan pengembang campuran kloroform-metanol air (20:60:10) dan ketika ditambah H2SO4 akan menimbulkan warna ungu-ungu gelap (Kristianingsih, 2003).

13

2.1.5.2 Tanin

Gambar 2.3 Struktur Tanin (Greig, 2014) Tanin merupakan senyawa polifenol yang larut dalam air, gliserol, metanol, hidroalkoholik, dan propilena glikol, tetapi tidak dapat larut dalam benzena, kloroform, eter, petroleum eter, dan karbon disulfida (Harborne 1987). Tanin mempunyai rasa sepat dan juga bersifat sebagai antibakteri dan astringent atau menciutkan dinding usus yang rusak karena asam atau bakteri (Wienarno, et al. 1997).

Menurut Mailoa, et al. (2014) tannin dapat berfungsi sebagai antimikroba dengan berekasi dengan protein. Tannin akan membentuk ikatan hidrogen dengan protein. Gugus karboksil dari ikatan peptida yang dimiliki protein akan bereaksi dengan gugus hidroksi dari tannin. Pembentukan ikatan hidrogen antara tannin dan protein menyebabkan terjadinya denaturasi protein.

Gambar 2.4 Ikatan Hidrogen yang Terbentuk antara Tannin dengan Protein (Berbehenn, 2011)

14

Selain dengan protein, tannin juga dapat merusak sel bakteri yaitu dengan bereaksi dengan fosfolipid yang terdapat dalam membran sel. Tanin akan merusak membran

sel

yang

menyebabkan kebocoran pada

sel

sehingga

akan

menonaktifkan system enzim bakteri. Kerusakan membran sel tersebut mencegah masuknya bahan makanan atau nutrisi yang diperlukan oleh bakteri untuk menghasilkan energi sehingga hal tersebut dapat menyebabkan kematian pada bakteri.

Gambar 2.5 Hasil dari SEM Morfologi dari Sel Normal E. coli (Mailoa, et al., 2014)

Gambar 2.6 Hasil dari SEM Morfologi dari Sel Bakteri E.coli yang diberi Ekstrak Tannin dari Daun Jambu Biji (Mailoa, et al., 2014) Analisa kerusakan sel bakteri telah dilakukan oleh Mailoa, et al. (2014) menggunakan alat SEM atau Scanning Electron Microscope telah menunjukkan bahwa terdapat pengaruh ekstrak tannin dengan konsentrasi 1% terhadap bakteri

15

Eschericia coli yang menyebabkan dinding sel Eschericia coli menjadi bergelombang, terdapat lekukan, dan tonjolan yang ditunjukkan oleh tanda panah pada gambar. Adanya tonjolan pada dinding sel bakteri disebabkan karena meningkatnya porositas membrane sel dan melemahnya dinding sel bakteri yang dilakukan

oleh

tannin.

Peningkatan

porositas

membran

permeabilitas

menyebabkan perubahan sel yang dapat menyebabkan kebocoraan sel. Perubahan permeabilitas dinding sel akan menyebabkan cairan akan merembes keluar dan membentuk ruang antar sitoplasma. Ruang ini akan semakin membesar yang diikuti dengan melemahya dinding sel sehingga sel akan menjadi pecah. Tanin dapat diidentifikasi secara kualitatif menggunakan reagen dan metode Kromatografi lapis tipis. Reaksi tabung yang dilakukan adalah dengan dilarutkan dalam air dan ditambahkan pereaksi FeCl3 dan bereaksi positif jika larutan berwarna biru atau hitam. (Farnsworth, 1996). Menurut Harborne (1987) cara sederhana untuk mendeteksi senyawa fenol sederhana yaitu menambahkan ekstrak dengan FeCl3 1 % dalam air akan menimbulkan warna hijau, ungu, merah, dan biru atau hitam yang kuat. Terbentuknya warna hijau atau biru tinta pada sampel setelah penambahan FeCl3 kemungkinan senyawa tanin akan membentuk kompleks dengan ion Fe3+ seperti gambar berikut:

Gambar 2.7 Reaksi antara Tanin dengan FeCl3 (Darmawijaya, 2013)

16

Analisa Kualitatif menggunakan metode KLT dapat dilakukan dengan menggunakan pengembang asam asetat glasial-air-HCl pekat (forestal) (30:10:3), dengan pereaksi FeCl3 menghasilkan warna lembayung (Nuraini, 2002). 2.1.5.3 Flavonoid Senyawa flavonoid merupakan salah satu senyawa kimia yang terkandung dalam sambiloto yang bersifat bakteriostatik. Mekanisme kerjanya dengan mendenaturasi protein sel bakteri dan merusak membran sitoplasma. Senyawa flavonoid dapat merusak membran sitoplasma yang dapat menyebabkan bocornya metabolit penting dan menginaktifkan sistem enzim bakteri. Kerusakan ini memungkinkan nukleotida dan asam amino merembes keluar dan mencegah masuknya bahan-bahan aktif ke dalam sel, keadaan ini dapat menyebabkan kematian bakteri. Pada perusakan membran sitoplasma, ion H+ dari senyawa fenol dan turunannya (flavonoid) akan menyerang gugus polar (gugus fosfat) sehingga molekul fosfolipida akan terurai menjadi gliserol, asam karboksilat dan asam fosfat. Hal ini mengakibatkan fosfolipida tidak mampu mempertahankan bentuk membran sitoplasma akibatnya membran sitoplasma akan bocor dan bakteri akan mengalami hambatan pertumbuhan dan bahkan kematian. Reaksi penguraian fosfolipida pada membran sitoplasma bakteri oleh flavon ditunjukkan dalam Gambar 2.7 (Retnowati, dkk., 2011)

Gambar 2.8 Reaksi Penguraian Fosfolipida pada Membran Sitoplasma Bakteri oleh Flavon (Retnowati, dkk., 2011)

17

Flavonoid dapat diidentifikasi secara kualitatif menggunakan reaksi tabung dan metode Kromatografi lapis tipis. Reaksi tabung yang dilakukan adalah dengan ditambahkan 0,5 g serbuk magnesium dan 1 mL HCl pekat. Setelah ditambahkan, terbentuk adanya warna merah, kuning, atau jingga pada larutan yang menunjukkan positif adanya flavonoid. Warna merah yang ditimbulkan disebabkan karena adanya reduksi dengan magnesium dan HCl pekat (Farnsworth, 1996). Analisa dengan menggunakan metode KLT, digunakan eluen Kloroform : metanol (1:39). Pemilihan eluen tersebut didasarkan atas penelitian yang dilakukan Inayah (2011) dalam pemilihan eluen terbaik untuk Isolasi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid dari Tanaman Anting-Anting. Kemudian diamati dibawah sinar UV menghasilkan warna ungu gelap. 2.1.5.4 Alkaloid

Gambar 2.9 Struktur Alkaloid (Lenny, 2006) Keaktifan biologis dari senyawa alkaloid disebabkan karena adanya gugus basa yang mengandung nitrogen. Adanya gugus basa ini apabila mengalami kontak dengan bakteri akan bereaksi dengan senyawa - senyawa asam amino yang menyusun dinding sel bakteri dan juga DNA bakteri yang merupakan penyusun utama inti sel yang merupakan pusat pengaturan segala kegiatan sel. Reaksi ini terjadi karena secara kimia suatu senyawa yang bersifat basa akan bereaksi dengan senyawa asam dalam hal ini adalah asam amino karena sebagian besar asam amino telah beraksi dengan gugus basa dari senyawa alkaloid.

18

Perubahan susunan asam amino ini jelas akan merubah keseimbangan genetik pada asam DNA sehingga DNA bakteri akan mengalami kerusakan. Kerusakan DNA pada inti sel bakteri akan mendorong terjadinya lisis pada inti sel, sehingga akan terjadi kerusakan sel. Kerusakan sel mengakibatkan sel-sel bakteri tidak mampu melakukan metabolisme sehingga akan mengalami lisis (hancur). (Siregar, dkk., 2012) Alkaloid dapat diidentifikasi secara kualitatif menggunakan reaksi tabung dan metode Kromatografi lapis tipis. Reaksi tabung yang dilakukan adalah dengan dibasakan dengan amonia dan ditambahkan kloroform kemudian dikocok kuatkuat. Lapisan kloroform yang terbentuk ditampung dan ditambahkan asam klorida 2N kemudian dikocok kuat-kuat. Lapisan asam dipipet dan ditambahkan pereaksi Dragendorff. Apabila terdapat endapan jingga/kuning menunjukkan positif adanya alkaloid (Farnsworth, 1996). Analisa menggunakan metode KLT dapat dilakukan dengan eluen Kloroform : metanol (95:5). Kemudian diamati dibawah sinar UV dan di semprot dengan pereagen dragendrof warna noda yang dihasilkan adalah jungga /coklat. (Ayuni, dkk., 2013) 2.1.5.5 Steroid dan Terpenoid

Gambar 2.10 Struktur Dasar Steroid (Siregar, dkk., 2012) Senyawa steroid/triterpenoid juga memiliki potensi sebagai senyawa antibakteri. Senyawa steroid/triterpenoid menghambat pertumbuhan bakteri

19

dengan mekanisme penghambatan terhadap sintesis protein karena terakumulasi dan menyebabkan perubahan komponen-komponen penyusun sel bakteri itu sendiri. Senyawa terpenoid dan steroid mudah larut dalam lipid sifat inilah yang mengakibatkan senyawa ini lebih mudah menembus dinding sel bakteri Gram positif dan sel bakteri Gram negatif (Siregar, dkk., 2012) Steroid dan terpenoid dapat diidentifikasi secara kualitatif menggunakan reaksi tabung dan metode Kromatografi lapis tipis. Reaksi tabung yang dilakukan adalah dengan ditambahkan sedikit eter dan dikocok. Kemudian lapisan eter diambil dan diteteskan pada plat tetes hingga kering. Setelah kering, ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat. Perubahan warna menjadi jingga, merah, atau kuning menunjukkan adanya terpenoid, sedangkan adanya steroid menunjukkan warna hijau pada plat tetes (Farnsworth, 1996). Analisa dengan menggunakan metode KLT dilakukan dengan menggunakan pengembang n-heksana-etil asetat (7:3) dengan pereaksi Lieberman-Burchard menunjukkan warna hijau (steroid) dan warna jingga, merah , kuning (terpenoid) (Handayani, dkk., 2008).

2.2 Ekstraksi Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Kelarutan dan stabilitas senyawa pada simplisia terhadap pemanasan, udara, cahaya, logam berat dan derajat keasaman dipengaruhi olah struktur kimia yang berbeda-beda. (Depkes RI, 2000)

20

Simplisia yang lunak seperti rimpang, akar dan daun mudah diserap oleh pelarut, sehingga pada proses ekstraksi tidak perlu diserbuk sampai halus. Sedangkan simplisia yang keras seperti biji, kulit kayu, dan kulit akar susah diserap oleh pelarut, karena itu perlu diserbuk sampai halus. Selain sifat fisik dan senyawa aktif dari simplisia, senyawa-senyawa yang terdapat dalam simplisia seperti protein, karbohidrat, lemak dan gula juga harus diperhatikan (Depkes RI, 2000). Ektraksi memiliki beberapa macam teknik antara lain adalah teknik ekstraksi tunggal dan esktraksi bertingkat.

2.2.1 Ektraksi Tunggal Ekstraksi tunggal adalah teknik ekstraksi pada bahan secara langsung menggunakan satu jenis pelarut atau campuran pelarut. Metode ekstraksi tunggal yang paling sering digunakan adalah metode maserasi. (Septiana, et al., 2013) 2.2.1.1 Maserasi Maserasi ialah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan (kamar). Secara teknologi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian konsentrasi pada keseimbangan. Cara ini dapat menarik zat-zat berkhasiat yang tahan pemanasan maupun yang tidak tahan pemanasan. (Depkes RI, 2000) Maserasi dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari akan menembus dinding sel dan masuk kedalam rongga sel yang mengandung zat aktif. Zat aktif akan larut dalam simplisia karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif didalam sel dengan yang diluar sel,

21

maka larutan yang terpekat didesak keluar. Pada penyarian dengan maserasi, perlu dilakukan pengadukan. Pengadukan diperlukan untuk meratakan konsentrasi larutan diluar butir serbuk simplisia, sehingga dengan pengadukan tersebut derajat perbedaan konsentrasi yang sekecil kecilnya antara larutan didalam sel dengan diluar sel tetap terjaga. Keuntungan dari metode maserasi ini adalah unit alat yang dipakai sederhana, hanya dibutuhkan bejana peredam, biaya operasionalnya relatif rendah, prosesnya relatif hemat penyari, dan tanpa pemanasan. Sehingga dapat dikatakan bahwa maserasi merupakan metode yang pengerjaan dan peralatan yang sederhana serta mudah diusahakan. Kelemahan dari metode ini adalah proses penyariannya tidak sempurna karena zat aktif hanya mampu terekstraksi sebesar 50% saja, proses berjalan cukup lama yaitu membutuhkan beberapa hari. (Depkes RI, 2000) 2.2.2 Ekstraksi Bertingkat Ekstraksi bertingkat adalah ekstraksi dengan beberapa pelarut yang tingkat kepolarannya berbeda-beda. (Septiana, et al., 2013) Ektraksi bertingkat ini biasa disebut dengan fraksinasi. Menurut Kamus Besar Bahasa Indonesia, fraksinasi diartikan sebagai proses, cara, pembuatan menjadi fraksi – fraksi (bagian bagian). Fraksinasi dilakukan secara bertingkat berdasarkan tingkat kepolaranya yaitu dari non polar, semi polar, dan polar. Senyawa yang memiliki sifat nonpolar akan larut dalam pelarut non polar, senyawa yang memiliki sifat semi polar akan larut dalam pelarut semi polar, dan yang bersifat polar akan larut kedalam pelarut polar (Harbone, 1987). Fraksinasi dapat dilakukan menggunakan beberapa metode. Metode yang paling sering digunakan adalah fraksinasi dengan

22

menggunakan corong pisah. Corong pisah merupakan peralatan laboratorium yang digunakan untuk memisahkan komponen – komponen dalam campuran antara dua fase pelarut yang memiliki massa jenis berbeda yang tidak saling campur. 2.2.3 Pelarut Pemilihan cairan penyari harus mempertimbangkan banyak faktor (Depkes,1986). Berikut adalah beberapa faktor yang harus diperhatikan dalam pemilihan pealrut menurut Guenther (1987) adalah : 1.

Selektifitas Pelarut hanya boleh melarutkan ekstrak yang diinginkan, bukan komponen

– komponen lain dari bahan ekstraksi. 2. Kelarutan Pelarut sedapat mungkin memiliki komponen melarutkan ekstrak yang besar (kebutuhan pelarut lebih sedikit). 3. Reaktifitas Pada umumnya pelarut tidak boleh menyebabkan perubahan secara kimia pada komponen-komponen bahan ekstraksi. 4. Titik didih Karena ekstrak dan pelarut biasanya harus dipisahkan dengan cara penguapan, destilasi atau rektifikasi, maka titik didih kedua bahan itu tidak boleh terlalu dekat. Ditinjau dari segi ekonomi, akan menguntungkan jika pada proses ekstraksi titik didih tidak terlalu tinggi. 5. Kriteria yang lain Pelarut sedapat mungkin harus murah, tersedia dalam jumlah besar, tidak beracun, tidak dapat terbakar, tidak eksplosif, tidak bercampur dengan udara,

23

tidak korosif, tidak membentuk terjadinya emulsi, memiliki viskositas yang rendah dan stabil secara kimia dan termis. Depkes (1995), menetapkan bahwa sebagai cairan penyari adalah air, etanol, etanol – air, atau eter. Pada penelitian ini, peneliti akan menggunakan etanol 70% sebagai cairan penyari saat melakukan maserasi, karena sifatnya yang semi polar maka hampir semua senyawa metabolit sekunder larut dengan etanol. Selain itu pemilihan cairan penyari tersebut didasarkan atas beberapa pertimbangan seperti sifat etanol yang lebih selektif, kapang dan kuman sulit tumbuh dalam etanol 20% keatas, tidak beracun, netral, absobsinya baik, etanol dapat bercampur dengan air pada segala perbandingan, serta panas yang diperlukan untuk pemekatan lebih sedikit (Depkes,1986) Kerugian dari penggunaan etanol sebagai cairan penyari adalah harganya yang mahal sehingga, untuk meningkatkan proses penyarian biasanya digunakan campuran antara etanol dan air. Perbandingan jumlah etanol dan air bergantung pada bahan yang akan disari. Dari pustaka dapat ditelusuri kandungannya baik zat aktif maupun zat lainnya (Depkes,1986) Proses fraksinasi dalam penelitian ini menggunakan pelarut non polar n – heksan, pelarut semi polar klroroform, dan pelarut polar etanol. Pelarut – pelarut tersebut dipilih berdasarkan atas tingkat kepolaritasannya yang dapat ditunjukkan lebih pasti dengan besarnya konstanta dielektrikum yang dimiliki oleh pelarut. Dimana semakin besar nilai konstanta dielektrikum suatu bahan pelarut maka pelarut tersebut semakin polar (Sudarmadji, dkk., 2007). Konstanta dielektrikum suatu bahan pelarut ditunjukkan pada tabel 2.1

24

Tabel 2.1 Konstanta Dielektrikum Bahan Pelarut Tingkat Kelarutan dalam Air Tidak Misibel Sedikit Larut * TL

Bahan Pelarut

Konstanta Dielektrikum (D)

n-Heksan

1,89

Petroleum Eter

1,90

TL

n-Oktan

1,95

TL

n-Dekan

1,99

TL

n-dodekan

2,01

TL

Sikloheksan

2,02

TL

1,4-Dioksan

2,21

Benzene

2,28

Toluene

2,38

TL

Furan

2,95

TL

Asam Propanoat

2,30

Dietil Teter

3,34

S

Kloroform

4,81

S

Butil Asetat

5,01

S

Etil Asetat

6,02

S

Asam Asetat (glasial)

6,15

S

Metil asetat

6,68

S

Tetrahidrofuran

7,58

S

Metilen Klorida

9,08

S

t-Butanol

10,09

M

Piridin

12,30

M

2-Butanol

15,80

S

n-Butanol

17,80

S

2-Propanol

18,30

1-Propanol

20,10

Aseton

20,70

M

Etanol

24,30

M

Metanol

33,60

M

Asam Formiat

58,50

M

Air

80,40

M

Kepolaran Non polar

M S

M

M S

Polar

*misibel artinya dapat bercampur dengan air dalam berbagai proporsi Sumber : Sudarmadji, S., dkk. 1997. Prosedur Analisis untuk Bahan Makanan dan Pertanian. Liberty. Yogyakarta.

25

2.2.3.1 n-Heksan Heksana adalah sebuah senyawa hidroksikarbon alkana dengan rumus kimia C6H14 (isomer utama n-heksana memiliki rumus CH3(CH2)4CH3. Awalan heks- merujuk pada enam karbon atom yang terdapat pada heksana dan akhiran – ana berasal dari alkana, yang merujuk pada ikatan tunggal yang menghubungkan atom – atom karbon tersebut. n-Heksan termasuk kedalam jenis pelarut non polar (Depkes,1995). Berikut adalah karateristik dari n-heksan menurut Depkes (1995). Sinonim

: Caproyl hydride, hexyl hydride

Rumus molekul

: CH3(CH2)4CH3

Berat molekul

: 86,17

Pemerian

: Cairan jernih tidak berwarna, mudah menguap, berbau seperti eter lemah, atau bau seperti petroleum

Titik lebur

: -94oC

Titik didih

: 69oC (P = 1 atm)

Spesific gravity

: 0,659

Kelarutan

: Tidak dapat larut dalam air; dapat bercampur dengan alcohol, kloroform, eter

Kegunaan

: Menentukan indeks bias mineral, pengisi termometer selain merkuri ( biasanya dengan perwarna biru atau merah )

Toksisitas manusia

: Dapat mengiritasi saluran pernafasan dalam konsentrasi tinggi, narkotika

26

2.2.3.2 Kloroform Kloroform mengandung tidak kurang dari 99,0% dan tidak lebih dari 99,5% CHCl3 sisanya terdiri dari alkohol. Perlu diperhatikan untuk tidak menguapkan kloroform bila ada nyala, sebab akan terbentuk gas yang berbahaya. (Depkes,1995). Berikut adalah karateristik kloroform menurut Depkes (1995) : Sinonim

: Triklorometana

Rumus Kimia

: CHCl3

Berat Molekul

: 119,38

Titik didih

: 60oC

Titik Lebur

: -63,5oC

Pemerian

: Cairan jernih, tidak berwarna, mudah mengalir; mempunyai sifat khas; bau eter; rasa manis dan membakar. Mendidih lebih kurang 61oC dipengaruhi oleh cahaya

Kelarutan

: Sukar larut dalam air; dapat bercampur dengan etanol, dengan eter, dengan benzene, dengan heksana, dan dengan lemak dan minyak menguap.

Bobot Jenis

: Antara 1,476 dan 1,480 , menunjukkan 99,0% sampai 99,5% CHCl3

Wadah dan Penyimpanan

: Disimpan dalam wadah tertutup rapat, terlindung dari cahaya pada suhu tidak lebih dari 30oC

27

2.3 Bakteri Bakteri merupakan sel prokariot yang khas, uniseluler dan tidak mengandung struktur yang membatasi membran di dalam sitoplasmanya. Reproduksi terutama dengan pembelahan biner sederhana yaitu suatu proses aseksual. Morfologi bakteri terdiri dari tiga bentuk, yaitu sferis (kokus), batang (basil), dan spiral. Ukuran bakteri bervariasi tetapi pada umumnya berdiameter sekitar 0,5-1,0 dan panjang 1,5-2,5 (Pelezar, M.J. dan E.C.S. Chan, 2008).

2.3.1 Struktur Bakteri Menurut Dzen, Sjoekoer M., et al. (2003) memiliki struktur bakteri yang terdiri dari : 1. Membran Sel Membran sel atau membran sitoplasma merupakan struktur tipis yang meliputi sel, yang terdiri atas protein (60-70%) dan fosfolipida (20-30%). Kekuatan struktur pada membran ini disebabkan oleh adanya ikatan hidrogen, hidrofobik, dan kation Mg dan Ca bersama fosfolipida. Fosfolipida terdiri dari bagian yang hidrofobik dan hidrofilik membentuk dua lapisan. Sementara protein pada membran tersusun atas protein integral dan periferal. Membran sel merupakan pembatas antara sitoplasma dan lingkungan luar. Dan merupakan penahan hidrofobik bagi molekul yang larut air, walaupun terdiri atas protein membran memberikan kemudahan bagi molekul kecil untuk melewati membran. Ini menunjukkan bahwa membran merupakan transport efektif bagi molekul yang akan melewati membran. Membran juga berperan dalam respirasi sel karena enzim yang berkaitan dengan proses respirasi merupakan bagian dari membran.

28

2. Dinding Sel Dinding sel berperan dalam memberikan bentuk dan kekuatan pada sel prokariot. Bakteri Gram positif dan Gram negatif memiliki perbedaan dalam struktur dinding selnya. Dinding sel bakteri Gram negatif merupakan struktur berlapis sedangkan bakteri Gram positif hanya mempunyai satu lapis. Pada bakteri Gram positif, dinding sel mengandung peptidoglikan yang tinggi (hingga 50%) dibandingkan bakteri Gram negatif. Adanya ikatan glikosida dan ikatan peptida pada peptidoglikan menyebabkan dinding sel dapat menahan tekanan dari luar. Bagian luar dinding bakteri Gram negatif diselimuti oleh lapisan lipida seperti polisakarida dan protein. Lapisan ini bersifat permeable terhadap molekul yang kecil tetapi tidak permeable terhadap molekul besar atau enzim. Berikut adalah gambar perbedaan dinding sel bakteri gram positif dan bakteri gram negatif.

Gambar 2.11 Diagram Skematik Dinding Sel Bakteri Gram positif dan Gram negatif (Kusnadi, dkk., 2003)

29

3. Bahan Nukleat Merupakan pembawa informasi genetik, DNA pada prokariot tidak diselubungi oleh suatu membran dan berupa untaian yang membentuk lingkaran dan berlipat-lipat di dalam sel. DNA pada bakteri dapat diisolasi dengan melisis dengan kuat sel bakteri dengan menggunakan larutan garam fisiologis dan dilanjutkan dengan sentrifugasi. DNA pada prokariot tidak diselubungi oleh suatu membran dan berupa untaian yang melingkar. DNA merupakan kromosom tunggal yanng membawa semua sifat yang diturunkan. Selain DNA kromosomal ditemui pula DNA ekstrakromosomal yang disebut plasmid. Plasmid ini dapat membawa sifat resistensi terhadap antibiotika. 4. Ribosom Merupakan partikel kecil yang terdiri dari protein 40% dan asam ribukleat (RNA) sekitar 60%. Ribosom berperan dalam mengatur sentesis protein. Ribosom mempunyai ukuran tertentu yang disebut Unit sedimentasi konstan yang dinyatakan dengan “S” atau Svedberg. 5. Membran Sitoplasma Membran sitoplasma adalah lapisan tipis yang terletak disebelah dalam dinding sel, tersusun oleh 60% protein dan 40% lipid yang umumnya berupa fosfolipid. Membrane sitoplasma merupakan barier yang fungsinya mengatur keluar masuknya bahan-bahan dari dalam sel atau dari luar sel, dan hanya bahanbahan tertentu saja yang dapat melewati. Sifat ini disebut semipermeabilitas membran sitoplasma. Fungsi membran sitoplasma yang lain adalah mengatur masuknya bahan-bahan makanan atau nutrisi yang diperlukan bakteri untuk menghasilkan energi. Membran sitoplasma juga merupakan target dari beberapa

30

jenis antimikroba, misalnya golongan polimiksin. Sedangkan bahan-bahan kimia yang dapat merusak dinding sel juga dapat merusak membran sitoplasma misalnya alkohol. 6. Mesosom Mesosom merupakan lipatan atau lekukan dari membran sitoplasma yang berperan aktif pada proses pembelahan sel dan metabolism. Bakteri Gram positif mesosomnya lebih besar dibandingkan dengan bakteri Gram negatif. 7. Inti sel Sel bakteri tidak mempunyai pembungkus inti yang sebenarnya. Di dalam inti, terdapat kromosom sebagai pusat informasi genetik yang mengatur semua kegiatan dari bakteri tersebut. 8. Kapsul Kapsul merupakan suatu lapisan tipis, berada di luar dinding sel dan secara kimiawi tersusun atas polisakarida, polipeptida, atau kedua-duanya. 9. Flagela Flagel kuman merupakan tambahan pada sel yang menyerupai benang dan seluruhnya terdiri atas protein, dengan garis tengah 12-30 mm. flagel merupakan alat penggerak bagi bentuk-bentuk kuman yang memilikinya. 10. Pili Banyak kuman-kuman Gram negatif memiliki tonjolan-tonjolan pada permukaan sel yang kaku yang dinamakan pili. 11. Spora Beberapa bakteri gram positif dalam keadaan tertentu dapat membentuk resting cells yang disebut endospora (spora). Pembentukan spora akan terjadi

31

apabila nutrisi esensial yang diperlukan tidak memenuhi kebutuhan untuk pertumbuhan bakteri. 2.3.2 Bakteri Penyebab Diare Terdapat berbagai macam bakteri yang dapat menyebabkan diare terutama penyebab diare akut, diantaranya adalah Escherichia coli, Salmonella sp, Ascaris lumbricoides dan Cryptosporidium. Escherichia coli merupakan bakteri utama penyebab diare, karena menurut dilakukan oleh Nweze di Nigeria menemukan bahwa bakteri Escherichia coli memiliki angka prevalensi terbesar sebagai penyebab diare pada balita dibandingkan dengan bakteri penyebab diare lainnya. 2.3.2.1 Escherichia coli Escherichia coli adalah bakteri yang menguntungkan yang banyak ditemukan di dalam usus besar manusia sebagai penghuni normal dalam saluran pencernaan, habitat pada umumnya adalah di tanah, lingkungan akuatik, makanan, air seni, dan tinja. Escherichia coli merupakan bakteri Gram negatif berbentuk batang pendek yang memiliki panjang sekitar 2 μm, diameter 0,7 μm, lebar 0,4-0,7μm dan bersifat anaerob fakultatif. Eschericia coli membentuk koloni yang bundar, cembung, dan halus dengan tepi yang nyata (Jawetz et al., 1995). Escherichia coli tidak membentuk spora, tidak tahan asam, sebagian besar bergerak (motil) dengan flagel peritrikus (merata tersebar ke seluruh pemukaan sel) tetapi ada pula yang nonmotil, dan beberapa strain mempunyai kapsul. Karena sifatnya yang patogen, bakteri ini dapat menyebabkan beberapa infeksi primer pada usus (misalnya diare pada anak), infeksi pada saluran kemih, pneumonia, abses, dan meningitis pada bayi yang baru lahir. (Jawetz, et al., 1995).

32

2.3.2.1.1 Klasifikasi Klasifikasi dari Escherichia coli menurut Krieg, et al. (1984) adalah sebagai berikut: Divisio

: Bacteria

Subdivisio

: Schizomycetes

Classis

: Schizomycetes

Ordo

: Eubacteriales

Familia

: Enterobacteriaceae

Tribe

: Escherichia

Genus

: Escherichia

Species

: Escherichia coli

2.3.2.1.2 Media pertumbuhan E.coli Bakteri ini dapat tumbuh secara anaerob fakultatif (umumnya bersifat kemoheterotrof). Nilai pH umum untuk pertumbuhannya adalah 7,0-7,5 serta kisaran suhu untuk pertumbuhannya 10 dengan suhu optimum 37oC Escherichia coli sangat tidak sensitif terhadap panas. Eschericia coli dapat ditemukan dalam air got, air sungai yang telah tercemar, air WC dan lain – lain. (Jawetz et al., 1995). Eschericia coli dapat tumbuh dalam media Nutrien agar dan media selektif untuk Eschericia coli. Media selektif yang biasa digunakan untuk membiakkan Eschericia coli adalah Eosin Methylene Blue Agar atau biasa disingkat dengan EMBA. Berikut adalah komposisi dari media EMBA (Eosin Methylene Blue Agar) menurut Atlas (2006) :

33

Komposisi : Pepton

10,0 gram

Lactose

10,0 gram

K2HPO4

2,0g

Eosin Y

0,4 gram

Methylene blue

0,065 gram

Agar

15,0 gram

pH

7.2± 0,2 at 25oC

Media Eosin Methylene Blue dapat digunakan untuk isolasi, diferensiasi dari bakteri gram negatif yang didasarkan atas fermentasi laktosa. Media Eosin Methylene Blue mempunyai keistimewaan mengandung laktosa dan berfungsi untuk memilah mikroba yang memfermentasikan laktosa seperti S. aureus, P. aerugenosa, Eschericia coli, dan Salmonella. Pada media ini pertumbuhan bakteri Eschericia coli dapat dilihat dengan adanya koloni berwarna hijau metalik. (Atlas, 2006) 2.3.3 Senyawa Antibakteri Antibakteri adalah suatu komponen kimia yang berkemampuan dalam menghambat pertumbuhan atau berkemampuan dalam mematikan bakteri (Volk dan Wheeler, 1998). Bahan antibakteri adalah bahan yang mengganggu pertumbuhan dan metabolisme bakteri (Palezar dan Chan,1988). Berdasarkan pengertian diatas dapat diartikan bahwa antibakteri adalah suatu bahan yang mempunyai aktivitas untuk menghambat atau membunuh bakteri.

34

Kelompok zat

kimia

yang dapat

membunuh atau

menghambat

pertumbuhan bakteri antara lain persenyawaan alkohol, unsur halogen, alkali (basa) dan asam (Volk dan Wheeler, 1998). 2.3.3.1 Mekanisme kerja Antibakteri Menurut (Volk dan Wheeler, 1998), antibakteri dalam melakukan efeknya harus mampu mempengaruhi bagian sel yang vital seperti membran sitiplasma, enzim, dan protein. Menurut Palezar dan Chan (1988), mekanisme kerja senyawa antibakteri adalah sebagai berikut : 1. Merusak Dinding Sel Struktur dinding sel dapat dirusak dengan cara menghambat pembentukan atau mengubahnya setelah terbentuk. Kerusakan pada dinding sel akan berakibat terjadinya perubahan – perubahan yang mengarah pada kematian sel. 2. Merubah Permeabilitas Membran Sel Kerusakan pada membran sel akan memungkinkan ion organik penting, nukleotida, asam amino dan enzim keluar dari sel sehigga mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan sel atau matinya sel. 3. Merubah Molekul Protein dan Asam Nukleat Hidupnya suatu sel bergantung pada terpeliharanya molekul – molekul protein dan asam nukleat keadaan alamiahnya. Konsentrasi tinggi beberapa zat kimia dapat mengakibatkan denaturasi molekul – molekul protein dan asam nukleat.

35

4. Menghambat Kerja Enzim Suatu sel yang normal memiliki sejumlah enzim untuk membantu kelangsungan proses metabolisme bersama protein yang lain. Penghambatan pada kerja enzim dapat mengakibatkan terganggunya metabolisme atau matinya sel. 5. Menghambat Sintesa Asam Nukleat dan Protein DNA (Deoxyribonucleic Acid) dan RNA (Ribonucleic Acid) dan protein memegang peranan penting dalam proses kehidupan sel. Gangguan yyang terjasi pada pembentukan dan fungsi zat – zat tersebt mengakibatkan kerusakan sel. 2.3.3.2 Faktor – faktor yang Mempengaruhi Kerja Antibakteri Menurut Palezar dan Chan (1988), beberapa hal yang dapat mempengaruhi kerja zat antibakteri adalah sebagai berikut : 1. Konsentrasi Senyawa Antibakteri Semakin tinggi konsentrasi senyawa antibakteri, maka semakin tinggi pula daya antibakterinya artinya, banyak bakteri akan terbunuh lebih cepat bila konsentrasi zat tersebut lebih tinggi. 2. Jumlah Mikroorganisme Perusakan mikroorganisme oleh suatu antibakteri merupakan suatu proses yang teratur dan tidak mungkin semua bakteri akan mati dalam waktu yang bersamaan. Semakin lama suatu bakteri berada di bawah pengaruh senyawa antibakteri, semakin besar kemungkinan matinya bakteri tersebut. 3. Suhu Kenaikan suhu di bawah suhu maksimal secara terus menerus dapat meningkatkan efektivitas senyawa bakteri. Hal ini disebabkan zat kimia merusak

36

bakteri melalui reaksi kimia dan reaksi kimia akan dipercepat dengan adanya kenaikan suhu. 4. Spesies Mikroorganisme Spesies mikroorganisme menunjukkan ketahanan yang berbeda – beda terhadap suatu bahan kimia tertentu. 5. Adanya Bahan Organik Adanya bahan organik asing dapat menurunkan efektivitas suatu antibakteri. Hal tersebt disebabkan adanya bahan organic dalam pencampuran zat antibakteri dapat mengakibatkan penggabungan antibakteri dengan bahan organic membentuk produk yang tidak bersifat antibakteri, menghasilkan suatu endapan yang mempengaruhi daya antibakteri, akumulasi bahan organik pada permukaan bakteri (sel mikroba) menjadi suatu perbandingan yang dapat mengganggu kontak antara zat antibakteri dengan sel. 6. Keasaman dan Kebasahan Mikroorganisme yang hidup pada pH asam akan mudah dibasmi pada suhu rendah dan dalam waktu yang singkat jika dibandingkan hidup pada pH basa.

2.4 Metode Difusi Metode disc diffusion (tes Kirby & Bauer) untuk menentukan aktifitas agen antimikroba. Cawan yang berisi agen antimikroba diletakan pada media agar yang telah ditanami mikroorganisme yang akan berdifusi tersebut. Area jernih mengidentifikasi adanya hambatan pertumbuhan mikroorganisme oleh agen antimikroba pada permukaan media agar (Pratiwi, 2008). Keuntungan dari penggunaan metode difusi ini adalah jumlah sampel yang digunakan kecil dan

37

bisa dikerjakan dalam satu petridish 5 – 6 sampel sekaligus untuk satu jenis mikroorganisme. Menurut Maradona (2013) metode ini terdiri dari tiga macam jenis, yaitu :

2.4.1 Cara Cakram (disc) Zat antibakteri dijenuhkan kedalam kertas cakram ditanam pada media perbenihan agar padat yang telah dicampur dengan bakteri yang diuji, kemudian diinkubasi pada suhu 37 oC selama 18-24 jam. Selanjutnya diamati adanya area (zona)

jernih

disekitar

kertas cakram yang menunjukkan ada tidaknya

pertumbuhan bakteri. 2.4.2 Cara Parit (ditsh) Media perbenihan agar padat yang telah dicampur dengan bakteri uji dibuat parit kemudian diisikan zat antibakteri dan diinkubasi pada suhu 37 oC selama 18-24 jam. Selanjutnya diamati adanya zona jernih disekitar parit yang menunjukkan ada tidaknya pertumbuhan bakteri. 2.4.3 Cara Sumur (cup) Media perbenihan agar padat yang telah dicampur dengan bakteri uji dibuat sumur kemudian diisikan zat antibakteri dan di inkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam. Selanjutnya diamati adanya zona jernih disekitar sumur yang menunjukkan ada tidaknya pertumbuhan bakteri.

38

2.5 Kerangka Konsep

Bakteri penyebab utama terjadinya diare adalah Escherichia coli. Hal tersebut didukung dengan adanya penelitian yang dilakukan oleh Nweze di Nigeria menemukan bahwa diare terbanyak pada balita adalah disebabkan oleh bakteri Escherichia coli yakni sebesar 28,08% dan diikuti oleh Salmonella sp.

39

sebanyak 5,6%. Pertumbuhan Escherichia coli dapat dihambat atau dibunuh menggunakan senyawa antibakteri yang berasal dari daun rambutan. Telah banyak penelitian yang dilakukan mengenai ekstrak daun rambutan sebagai senyawa antibakteri termasuk penelitian yang dilakukan oleh Rahayu (2012). Dari penelitian tersebut telah dibuktikan bahwa ekstrak kental dari hasil meserasi menggunakan pelarut etanol daun rambutan yang masih muda memiliki aktivitas menghambat dan membunuh bakteri Escherichia coli pada dosis 10 gram simplisa. Daun rambutan diekstrak untuk mendapatkan senyawa yang terkandung didalamnya yaitu tannin dan saponin. Akan tetapi dalam proses ekstraksi tidak menutup kemungkinan terdapat senyawa lain yang terkandung dalam daun rambutan yang juga terkandung dalam bagian rambutan lainnya. Seperti halnya kandungan senyawa steroid, terpenoid, dan alkaloid yang terkandung dalam kulit buah rambutan, dan kandungan senyawa flavonoid yang terkandung dalam biji dan kulit batang rambutan. Ekstrak yang mengandung senyawa multi komponen tersebut difraksinasi dengan pelarut yang bersifat nonpolar hingga polar. Fraksi yang pertama yaitu fraksi n-heksan. n-Heksan merupakan pelarut yang bersifat non polar yang diduga akan menarik senyawa steroid dan terpenoid yang bersifat non polar. Fraksi yang kedua yaitu fraksi kloroform. Kloroform merupakan pelarut yang bersifat semi polar sehingga diduga akan menarik senyawa yang juga bersifat semi polar yaitu alkaloid. Fraksi yang terakhir yaitu fraksi etanol yang diduga mengandung senyawa polar yaitu tannin, saponin, dan flavonoid. Fraksi aktif tersebut berpotensi memiliki senyawa antibakteri yang dapat menghambat atau membunuh bakteri Escherichia coli, akan tetapi belum diketahui fraksi manakah yang paling aktif dalam menghambat atau membunuh

40

bakteri Escherichia coli. Hal tersebut dapat diketahui dengan melakukan identifikasi aktifitas senyawa antibakteri dari tiap fraksi.

2.6 Hipotesis Fraksi aktif etanol merupakan fraksi yang paling aktif dalam menghambat atau membunuh bakteri Escherichia coli.

BAB III METODE PENELITIAN

3.1 Rancangan Penelitian Berdasarkan tujuannya penelitian ini termasuk kedalam penelitian eksperimental, yaitu mengamati aktifitas fraksi aktif yang terdiri fraksi n-heksan, fraksi kloroform, dan fraksi etanol dari ekstrak daun rambutan dalam mengambat pertumbuhan bakteri Eschericia coli. Untuk mengetahui aktivitas antibakteri dari tiap fraksi dilakukan dengan menggunakan metode difusi cakram. Metode difusi cakram merupakan metode yang paling sederhana dibandingkan dengan metode yang lain dan banyak digunakan untuk mengetahui aktivitas suatu ekstrak atau bahan dalam mengambat pertumbuhan bakteri. Penelitian dilakukan melalui tiga tahapan kerja. Tahap pertama adalah tahap persiapan yang meliputi persiapan simplisia daun rambutan, dan alat – alat yang digunakan dalam penelitian. Tahap kedua adalah tahap pelaksanaan yang meliputi meliputi pembuatan ektrak etanol 70% daun rambutan, pengambilan fraksi aktif dari ekstrak daun rambutan, skrining fitokimia fraksi aktif, dan pengujian aktivitas antibakteri fraksi aktif ekstrak daun rambutan. Tahap ketiga adalah tahap akhir yang meliputi meliputi pengamatan dan pencatatan hasil pengujian, analisis data, dan pembuatan kesimpulan.

41

42

3.2 Populasi dan Sampel 3.2.1 Populasi Populasi dari penelitian ini adalah hasil fraksinasi dari ekstrak daun rambutan 3.2.2 Sampel Sampel dalam penelitian ini adalah 6g tiap fraksi aktif n – heksan, kloroform, dan etanol dari ekstrak daun rambutan.

3.3 Lokasi dan Waktu Penelitian 3.3.1 Lokasi Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi dan Laboratorium Farmakognosi Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang 3.3.2 Waktu Penelitian Waktu penelitian dilaksanakan pada bulan Februari 2016 hingga Maret 2016.

3.4 Definisi Operasional daan Variabel Definisi operasional variabel dalam penelitian ini terdiri atas variabel bebas dan variabel terikat. Variabel bebas pada penelitian ini adalah fraksi aktif ekstrak etanol 70% daun rambutan. Sedangkan variabel terikatnya adalah aktivitas antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli. Definisinoperasional variabel dapat dilihat pada tabel 3.1.

43

Tabel 3.1 Definisi Operasional Variabel Variabel

Sub Variabel

1. Fraksi n – heksan

Fraksi aktif ekstrak daun rambutan

2. Fraksi kloroform

3. Fraksi etanol

Aktifitas antibakteri Escherichia coli

Definisi Indikator Operasional 1. Hasil 1. Ekstrak fraksinasi nkental nheksan dari heksan ekstrak etanol 70% daun rambutan 2. Hasil 2. Ekstrak fraksinasi kental kloroform kloroform dari fraksi nheksan daun rambutan 3. Hasil fraksinasi etanol dari fraksi kloroform daun rambutan Kemampuan tiap fraksi ekstrak daun rambutan dalam mengahambat atau membunuh bakteri Escherichia coli sebagai bakteri penyebab diare

Alat Ukur

Hasil Ukur

KLT / Uji Tabung

Skrining Fitokimia

Jangka sorong

mm

Skala ukur

Nominal

3. Ekstrak kental etanol

Diameter zona bening yang dihasilkan oleh tiap fraksi yang terdapat disekitar kertas cakram

3.5 Alat dan Bahan 3.5.1 Alat Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah timbangan kasar, pisau, loyang, corong gelas, gelas ukur, batang pengaduk, Erlenmeyer 250mL, rotary evaporator, cawan penguap, cawan petri, tabung reaksi, neraca analitik, blue tip,

Rasio

44

botol coklat, botol semprot, autoklaf, bunsen, corong pisah, incubator, jangka sorong, kaki tiga, kawat ose, kompor gas, mikropipet, oven, pinset, pipet tetes, serta rak tabung rekasi. 3.5.2 Bahan Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun rambutan, etanol 70% teknis, kertas saring, pelarut n-heksan teknis, kloroform teknis, aquades, media Nutrien agar, media Eosin Mehthilen Blue (EMB), NaCl, kertas coklat, plat KLT

3.6 Prosedur Penelitian 3.6.1 Determinasi Tanaman Determinasi tanaman rambutan dilakukan di UPT. Materia Media Batu, Malang. 3.6.2 Proses Ekstraksi Daun Rambutan Daun rambutan yang masih muda (berada pada bagian pucuk) diambil sebanyak 50 gram dan dicuci bersih. Kemudian diangin – anginkan pada tempat yang tidak terkena sinar matahari langsung sampai kering. Bahan yang sudah kering di maserasi dengan menggunakan pelarut etanol 70% sampai simplisia terendam kira – kira 1 – 2 cm diatas permukaan simplisia selama 5 hari dengan pengadukan setiap 2 hari sekali. Setelah 5 hari larutan disaring dengan kertas saring. Maserat yang diperoleh kemudian dievaporasi menggunakan rotary evaporator pada suhu 70oC selam kurang lebih 2 jam. Ekstrak siap untuk difraksinasi.

45

3.6.3 Proses Fraksinasi Ekstrak kental hasil maserasi diambil sebanyak ± 50 gram dilarutkan dalam etanol 70% sebanyak 50mL. Menurut Febriyanti (2013) fraksinasi dilakukan dengan perbandingan ekstrak cair : pelarut = 1 : 1. Pemisahan dilakukan menggunakan corong pisah dengan pelarut n-heksan sebanyak kurang lebih 3 x 15mL, sehingga diperoleh dua fase yaitu fase n-heksan dan fase etanol. Fase n-heksan dikumpulkan dan fase etanol difraksinasi menggunakan pelarut klororform sebanyak kurang lebih 3 x 15mL sehingga diperoleh dua fase yaitu fase kloroform dan fase etanol. Fase kloroform dan fase etanol dikumpulkan. Masing – masing hasil fraksi yang diperoleh kemudian dievaporasi menggunakan rotary evaporator pada suhu 70oC. Ekstrak siap untuk diuji. 3.6.4 Skrining Fitokimia Ekstrak kental dilakukan penapisan fitokimia (Farnsworth, 1996) untuk mengetahui masing-masing golongan senyawa kimia yang terkandung dalam ekstrak dan fraksi. 3.6.4.1 Uji Alkaloid 3.6.4.1.1 Uji Tabung Ekstrak dibasakan dengan amonia dan ditambahkan kloroform kemudian dikocok kuat-kuat. Lapisan kloroform yang terbentuk ditampung dan ditambahkan asam klorida 2 N kemudian dikocok kuat-kuat. Lapisan asam dipipet dan ditambahkan pereaksi Dragendorff, dan bagian ketiga sebagai blanko. Apabila terdapat endapan jingga/kuning menunjukkan positif adanya alkaloid (Farnsworth, 1996).

46

3.6.4.1.2 Metode KLT Hasil ekstak maupun fraksi ditotolkan pada plat KLT dengan menggunakan eluen Kloroform : metanol (95:5). Kemudian diamati dibawah sinar UV dan di semprot dengan pereagen dragendrof. (Ayuni, dkk., 2013) 3.6.4.2 Uji Flavonoid 3.6.4.2.1 Uji Tabung Ekstrak ditambahkan 0,5 g serbuk magnesium dan 1 mL HCl pekat. Setelah ditambahkan, terbentuk adanya warna merah, kuning, atau jingga pada larutan yang menunjukkan positif adanya flavonoid (Farnsworth, 1996). 3.6.4.2.2 Metode KLT Eluen yang digunakan Kloroform : metanol (1:39). Pemilihan eluen tersebut didasatkan atas penelitian yang dilakukan Inayah (2011) dalam pemilihan eluen terbaik untuk Isolasi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid dari Tanaman Anting-Anting. Kemudian diamati dibawah sinar UV 3.6.4.3 Uji Terpenoid dan Steroid 3.6.4.3.1 Uji Tabung Ekstrak ditambahkan sedikit eter dan dikocok. Kemudian lapisan eter diambil dan diteteskan pada plat tetes hingga kering. Setelah kering, ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat. Perubahan warna menjadi jingga, merah, atau kuning menunjukkan adanya terpenoid, sedangkan adanya steroid menunjukkan warna hijau pada plat tetes (Farnsworth, 1996).

47

3.6.4.3.2 Metode KLT Digunakan pengembang n-heksana-etil asetat (7:3) dengan pereaksi Lieberman-Burchard menunjukkan warna hijau (steroid) dan warna jingga, merah , kuning (terpenoid) (Handayani, dkk., 2008). 3.6.4.4 Uji Saponin 3.6.4.4.1 Uji Tabung Ekstrak ditambahkan air dan dikocok sehingga menimbulkan busa yang stabil selama 10 menit. Pembuktian busa yang terbentuk merupakan saponin dilakukan dengan penambahan HCl 2 N,apabila busa tetap ada berarti busa merupakan saponin, jika hilang setelah penambahan HCl 2 N maka busa tersebut merupakan protein (Farnsworth, 1996). 3.6.4.4.2 Metode KLT Digunakan pengembang campuran kloroform-metanol air (20:60:10) dan ketika

ditambah

H2SO4

akan

menimbulkan

warna

ungu-ungu

gelap

(Kristianingsih, 2003). 3.6.4.5 Uji Tannin 3.6.4.5.1 Uji Tabung Ekstrak dilarutkan dalam air dan ditambahkan 3 tetes pereaksi FeCl3 dan bereaksi positif jika larutan berwarna biru atau hitam. (Farnsworth, 1996). 3.6.4.5.2 Metode KLT Digunakan pengembang asam asetat glasial-air-HCl pekat (forestal) (30:10:3), dengan pereaksi FeCl3 menghasilkan warna lembayung (Nuraini, 2002).

48

3.6.5 Pengujian Aktivitas Antibakteri dengan Metode Difusi Cakram 3.6.5.1 Pembiakan Bakteri Uji Bakteri dibiakkan dari air got dengan menggunakan media EMB. Ambil 1 mL air got dan masukkan kedalam masing – masing 3 cawan petri. Tuangkan media EMB kedalam 3 cawan petri kurang lebih masing – masing sebanyak 15mL tiap cawan petri dan inkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam. Selanjutnya bakteri Escherichia coli diisolasi dengan mengambil bakteri yang memiliki warna hijau metalik dengan kawat ose dan dibiakkan pada media agar miring EMB. 3.6.5.2 Identifikasi Bakteri Escherichia coli Setelah bakteri diisolasi dilanjutkan uji makroskopis dan mikroskopis dengan pewarnaan Gram. Setelah melakukan pewarnaan Gram kemudian diamati dibawah mikroskop terlihat sel berwarna merah dan terbentuk batang, maka dapat di katakan bakteri tersebut adalah bakteri Escherichia coli. 3.6.5.3 Pembuatan Suspensi bakteri Supensi bakteri dibuat dengan mengambil biakan murni dengan kawat ose secara aseptis. Kemudian dimasukkan ke dalam 25mL NaCl 0,9% dan dihomogenkan. Untuk mengetahui jumlah bakteri maka dilakukan pengamatan dengan spektrifotometri UV-Vis pada panjang gelombang 580nm hingga menunjukkan 25% T yang diasumsikan bahwa larutan tersebut mengandung 10 8 CFU/mL bakteri. 3.6.5.4 Pembuatan Cakram Uji Kertas cakram dibuat dengan menggunting bulat kertas saring dengan diameter kurang lebig 6 mm. Kemudian kertas cakram direndam dalam larutan uji kurang lebih selama 15 menit. Larutan uji yang akan dibuat terdiri dari tetrasiklin

49

sebagai kontrol positif, fraksi aktif n-heksan, fraksi aktif kloroform, fraksi aktif etanol dan Dimetil Sulfoksida (DMSO) sebagai kontrol negatif. Masing – masing ditimbang setara dosis 10 gram, lalu dilarutkan dalam 1 mL DMSO. Pemilihan tetrasiklin sebagai kontrol positif karena setelah dilakukan uji daya hambat antara tetrasiklin, amphisilin dan amoksilin dalam berbagai konsentrasi hasil zona bening yang diperoleh paling besar adalah tetrasiklin konsentrasi 20 mg/ml. (Mulyani, 2007). 3.6.5.5 Pengujian Pengujian dilakukan dengan menuang media EMB kedalam cawan petri kurang lebih sebanyak 15 mL dan dibiarkan hingga memadat. Kemudian ditambahkan 1 mL suspensi bakteri dan putar seperti angka delapan dan diamkan selama kurang lebih 10 menit agar bakteri dapat terserap dan tersebar merata. Pada setiap cawan petri ditempatkan 1 buah kertas cakram uji yang telah dibuat. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 37 oC selama 24 jam dan diukur diameter zona bening yang terbentuk. 3.6.6 Analisis Data Dalam penelitian ini analisa data yang dilakukan adalah dengan mengukur zona bening yang terdapat pada sekitar cakram. Data hasil pengamatan dianalisis menggunakan Uji One Way Anova. Analisis ini bertujuan untuk mengetahui adanya perbedaan aktivitas antibakteri beberapa hasil fraksinasi pada ekstrak daun rambutan.

BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Determinasi Tanaman Rambutan Bagian tanaman rambutan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun rambutan yang diperoleh dari pekarangan rumah di daerah Blitar. Determinasi tanaman rambutan dilakukan di UPT Materia Media, Batu. Tujuan dari dilakukannya determinasi untuk mengidentifikasi tanaman yang akan digunakan dalam penelitian sehingga potensi terjadinya kesalahan dalam penambilan tanaman dapat diminimalisir. Hasil determinasi menunjukkan bahwa tanaman rambutan yang digunakan benar tanaman rambutan (Nephelium lappaceum L) dengan varietas Binjai. Adapun hasil determinasi dilampirkan pada Lampiran 2.

4.2 Hasil Pembuatan Simplisia Daun rambutan yang digunakan adalah daun rambutan yang masih muda yaitu pada bagian pucuk daun yang berwarna hijau muda. Hal ini dikarenakan pada bagian daun yang masih muda memiliki kandungan tannin, flavonoid, dan saponin yang lebih banyak dibandingkan dengan daun yang tua (Djojopranoto, 2013). Daun rambutan muda dipetik sebanyak 2 kg kemudian dicuci bersih dan dikeringkan dengan cara diangin anginkan selama 1 minggu. Pengeringan dengan cara tersebut dipilih karena terdapat senyawa – senyawa yang terdapat dalam daun rambutan yang dapat rusak dengan pemanasan, seperti flavonoid dan tannin (Gupita, 2012). Simplisia daun rambutan telah siap kemudian diserbukkan, untuk

50

51

memperluas permukaan sehingga senyawa yang terlarut lebih maksimal, serbuk simplisia daun rambutan yang didapatkan adalah 1 kg.

4.3 Hasil Ekstraksi Daun Rambutan Serbuk simplisia daun rambutan kemudian ditimbang sebanyak 50 g dengan 3 kali penimbangan dan masing - masing diektraksi dengan metode maserasi selama 5 hari dengan pengadukan tiap 2 hari sekali agar proses ekstrasi menjadi lebih maksimal. Metode maserasi dipilih karena hanya melalui proses perendaman dengan pelarut tanpa proses pemanasan sehingga tidak merusak senyawa yang tidak tahan panas, selain itu metode ini merupakan metode yang sangat sederhana. Maserasi dilakukan dengan menggunakan pelarut etanol 70% dengan perbandingan etanol 70 bagian etanol 96% dan 30 bagian air. Pemilihan pelarut etanol 70% sebagai pelarut disebabkan karena etanol 70% memiliki sifat semipolar yang dapat melarutkan senyawa yang bersifat polar seperti tannin, saponin dan flavonoid maupun non polar seperti steroid dan terpenoid, selain itu etanol kapang dan kuman sulit tumbuh dalam etanol 20% keatas, tidak beracun, netral, absobsinya baik, etanol dapat bercampur dengan air pada segala perbandingan, serta panas yang diperlukan untuk pemekatan lebih sedikit (Depkes,1986). Perbandingan bahan segar dan pelarut yang digunakan adalah 10:75, sehingga banyaknya pelarut yang dibutuhkan untuk mengekstraksi tiap 50 gram serbuk simplisia daun rambutan adalah 375mL. Hasil maserasi yang diperoleh kemudian disaring menggunakan kertas saring dan ampas yang tertinggal diperas menggunakan kain penyari agar maserat yang diperoleh lebih banyak. Maserat selanjutnya diuapkan pelarutnya menggunakan rotary evaporator pada suhu 70oC dengan tekanan 1 atm untuk

52

memisahkan pelarut etanol dengan senyawa metabolit sekunder yang terekstrak dari

daun

rambutan.

Selanjutnya

maserat

tersebut

dipekatkan

dengan

menggunakan water bath dengan suhu 70oC untuk memaksimalkan proses pemisahan dengan etanol. Proses ekstraksi tersebut menghasilkan ekstrak kental berwarna coklat yang memiliki bau yang khas dengan berat ekstrak masing – masing 31,0513g ; 38,0421g ; 20,7891g sehingga didapatkan rata – rata berat ekstrak 29,96 gram. Rendemen yang diperoleh dari ketiga replikasi masing – masing sebesar 62,1026% ; 76,0842% ; 41,5782%. (Perhitungan terdapat pada Lampiran 8). Hasil pemeriksaan karakteristik dari ekstrak etanol daun rambutan terdapat pada tabel 4.1. Tabel 4.1 Hasil pemeriksaan Karakteristik Ekstrak Etanol Daun Rambutan Organoleptik

Hasil Pengamatan

Bentuk

Cairan kental

Warna

Coklat

Bau

Khas

Ekstrak yang didapatkan tersebut, memiliki karakteristik yang sama dan memiliki rendemen yang lebih besar dibadingkan dengan penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Rahayu (2012) yaitu menghasilkan rendemen sebesar 36,54%. Nilai rendemen yang lebih besar tersebut, disebabkan karena simplisia dijadikan dalam bentuk serbuk sedangkan pada penelitian Rahayu (2012) simplisia hanya dirajang kecil, sehingga proses ekstraksi lebih maksimal.

4.4 Hasil Fraksinasi Ekstrak Daun Rambutan Fraksinasi dilakukan dengan metode ekstraksi cair-cair. Metode ekstraksi cair-cair dipilih karena untuk memudahkan proses pemisahan yang sesuai dengan prinsip like dissolves like. Pelarut yang digunakan adalah n-heksan, kloroform,

53

dan etanol. Pelarut tersebut secara berturut – turut memiliki konstanta dielektrikum sebesar 1,89 ; 4,81 ; 24,30. Semakin besar nilai tetapan dielektrikum suatu pelarut maka sifat pelarut semakin polar. Ekstrak kental daun rambutan yang telah didapatkan kemudian ditimbang sebanyak 50 gram dan ditambahkan dengan etanol sebanyak 50 mL. Selanjutnya, difraksinasi dengan menggunakan pelarut n – heksan dengan volume yang sama yaitu 50 mL. Penggunaan pelarut n- heksan ditujukan untuk menarik senyawa yang bersifat nonpolar seperti steroid dan terpenoid. Penambahan dengan volume yang sama disebabkan karena perbandingan antara ekstrak cair dengan pelarut untuk proses fraksinasi adalah 1 : 1. Pada proses pemisahan tersebut terbentuk dua fase, fase atas yaitu fase n – heksan dan fase bawah yaitu fase etanol. Fraksinasi tersebut dilakukan sebanyak 3 kali hingga fase n- heksan menjadi jernih agar dapat terekstraksi secara maksimal. Fase etanol kemudian difraksinasi menggunakan pelarut kloroform dengan volume 4 x 50mL yang ditujukan untuk menarik senyawa yang bersifat semipolar seperti alkaloid. Dari pemisahan tersebut terbentuk dua fase, fase atas yaitu fase etanol dan fase bawah yaitu kloroform. Fase dipekatkan dengan menggunakan water bath dan diperoleh fase n – heksan, kloroform, dan etanol sebesar 19,1785g ; 6,5912g ; 23,3170g, dengan rendemen 38,1909%, 13,1253%,.dan 46,4320%. (Perhitungan terdapat dalam Lampiran 12). Hasil pemeriksaan organoleptik dari masing – masing fase terdapat pada tabel 4.2

54

Tabel 4.2 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Fraksi n-Heksan, Kloroform dan Etanol Dari Ekstrak Etanol Daun Rambutan Fase

Hasil Pengamatan

n- Heksan

Cairan agak kental, warna hijau kecoklatan, bau khas

Kloroform

Cairan kental, warna coklat, bau khas

Etanol

Cairan sangat kental, warna coklat pekat, bau khas

4.5 Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak dan Fraksi Aktif Ektrak Daun Rambutan Ektrak etanol daun rambutan, fase n – heksan, kloroform, dan etanol masing – masing diidentifikasi kandungan senyawa metabolit sekunder. Proses identifikasi dilakukan secara kualitatif menggunakan reagen dan kromatografi lapis tipis (KLT). Hasil skrining fitokimia terdapat pada tabel 4.3. Tabel 4.3 Hasil Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder Fraksi n-Heksan, Kloroform dan Etanol dari Ekstrak Etanol Daun Rambutan Golongan Senyawa

Identifikasi

Fase N heksan

Hasil Pengamatan Fase Fase Kloroform Etanol

Ekstrak

Hasil Literatur

Kesimpulan

Jingga Dragendrof

Orange bening

Jingga

Coklat

Jingga kecoklata n

Alkaloid KLT + Sinar UV

Tidak terbentuk noda

Hijau


Coklat

+ 0,5 g Mg + 1 mL HCl(p)

Hijau jernih

Terbentuk busa

Flavonoid

Hijau



Fase kloroform dan Ekstrak (+)

(Ayuni, dkk., 2013)

Coklat Merah / Jingga / Kuning

Merah kecoklata n dan terbentuk busa

Jingga

Coklat

Coklat

Noda Berwarna

Noda Berwarna

KLT + Sinar UV

(Farnsw orth, 1996) Coklat / Jingga

(Farnsw orth, 1996) Ungu (Inayah, 2011)

Fase etanol dan Ekstrak (+)

55

Ungu

Ungu Biru tua / Hitam

FeCl3

Kuning

Coklat Kehitaman

Hitam

Hitam

Tanin KLT + FeCl3 dan Sinar UV

Dikocok + HCl 2N

Saponin

Coklat Tidak terbentuk noda


Tidak terbentuk busa

Tidak terbentuk busa

KLT + H2SO4 + Sinar UV



Coklat

Hitam

Hitam

Terbentuk busa hingga lebih dari 10 menit

Terbentuk busa

Coklat

Coklat

Coklat

Noda berwarna ungu gelap pada saat dilihat dibawah sinar UV

(Farnsw orth, 1996)

Coklat


Biru tua / Hitam (Nuraini , 2002) Busa tetap ada setelah ditamba hkan HCl (Farnsw orth, 1996) Ungu (Kristia ningsih, 2003)


Noda berwarna ungu gelap pada saat dilihat dibawah sinar UV Steroid  Hijau

Steroid dan terpenoid

Ekstrak + eter  kocok  keringkan  + 2 tetes Asam Asetat anhidrat + 1 tetes H2SO4

Hijau dan ditengah terdapat warna merah

Coklat

KLT dan Sinar UV

Terbentuk noda Hijau dan Kuning


Coklat


Hijau dan ditengah terdapat warna jingga

Terbentuk noda Hijau dan Kuning

Terpeno id  Jingga / Merah / Kuning (Farnsw orth, 1996) Terbent uk noda Steroid  Hijau

Fase n – heksan dan Ekstrak (+)

56

Terpeno id  Jingga / Merah / Kuning (Handay ani, dkk., 2008)

Hasil tersebut menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun rambutan mengandung senyawa steroid, terpenoid, alkaloid, saponin, tanin, dan flavonoid. Hasil identifikasi tiap fase dapat diketahui bahwa fase n – heksan terbukti mengandung senyawa steroid dan terpenoid, fase kloroform mengandung senyawa alkaloid dan fase etanol mengandung senyawa saponin, flavonoid, tannin, dan saponin.

4.6 Hasil Pembiakan Pembuatan Suspensi bakteri Escherichia coli Bakteri Escherichia coli dapat dibiakkan melalui air got. Air got dipilih karena merupakan tempat berkembangnya bakteri Escherichia coli. Penggunaan bakteri Escherichia coli sebagai bakteri uji disebabkan karena bakteri ini merupakan bakteri utama penyebab diare. Air got dipilih sebagai bahan pembiakan bakteri Esherichia coli karena menurut Jawetz, et al. (1995) Esherichia coli dapat ditemukan pada air tersebut. Tiap 1 mL air got dimasukkan dalam cawan petri yang berisi media Eosin Methylen Blue (EMB). Media EMB merupakan media selektif yang digunakan untuk pertumbuhan bakteri yang dapat memfermentasi laktosa seperti bakteri Escherichia coli. Media yang telah diberi air got kemudian di inkubasi selama 24 jam dan dihasilkan pertumbuhan berbagai macam bakteri yang dapat memfermentasi laktosa. Berbagai macam bakteri yang

57

dihasilkan tersebut diambil bakteri dengan warna hijau metalik yang menandakan bahwa bakteri tersebut adalah bakteri Escherichia coli. Bakteri tersebut kemudian diisolasi pada media agar miring EMB dan diinkubasi selama 24 jam sehingga bakteri yang tumbuh pada media EMB hanya bakteri Escherichia coli, yang pertumbuhannya dapat ditandai dengan adanya warna hijau metalik. Bakteri Escherichia coli yang tumbuh kemudian dicampur kedalam larutan 100mL NaCl fisiologis (0,9%). Proses pencampuran bakteri kedalam larutan NaCl 0,9% disebabkan karena pada konsentrasi tersebut kondisi osmolalitas didalam sel bakteri sama dengan kondisi osmolalitas diluar sel bakteri sehingga bakteri dapat bertahan hidup. Untuk mengetahui jumlah bakteri maka dilakukan pengamatan dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 580nm hingga menunjukkan prosentase transmitan sebesar 25 yang diasumsikan bahwa larutan tersebut mengandung 108 CFU/mL bakteri.

4.7 Identifikasi Bakteri Escherichia coli Suspensi bakteri yang telah dibuat kemudian diambil sebanyak 1 mL dan dibiakkan pada media EMB selama 1 x 24 jam dengan suhu 37 oC. Bakteri yang telah tumbuh kemudian diidentifikasi secara mikroskopik yaitu melalui pewarnaan gram dan makroskopik untuk memastikan bahwa bakteri yang digunakan dalam penelitian tersebut hanya bakteri Escherichia coli. Pengamatan secara makroskopik, terlihat bahwa warna koloni dari bakteri adalah hijau metalik, membentuk koloni yang bundar, cembung, dan halus dengan tepi yang nyata. Pengamatan bakteri dengan menggunakan mikroskop yang sebelumnya telah diberi pewarnaan gram, terlihat bahwa bakteri merupakan bakteri gram

58

negatif yang ditandai dengan warna bakteri yang berwarna merah, berbentuk batang. Berdasarkan hasil tersebut dapat diketahui bahwa bakteri yang digunakan adalah benar – benar bakteri Esherichia coli, karena ciri – ciri yang ditunjukkan telah sesuai dengan ciri – ciri bakteri Esherichia coli yang terdapat pada Jawetz, et al. (1995). (Gambar hasil analisa terdapat pada Lampiran 16) Identifikasi bakteri seharusnya tidak hanya melalui uji makroskopik dan uji pewarnaan gram saja, akan tetapi perlu dilakukan pengujian lebih lanjut yang sesuai dengan standar, agar lebih meyakinkan bahwa bakteri yang digunakan merupakan benar – benar murni bakteri Escherichia coli. Pengujian yang dianjurkan oleh Badan Pengawas Obat dan Makanan adalah uji konfirmasi berdasarkan reaksi biokimia. Paengujian tersebut meliputi reaksi Indole, Methyl Red, Voger Prokauer, dan Citrat atau yang biasa disingkat dengan IMViC. Uji tersebut menunjukkan positif bahwa bakteri Escherichia coli apabila positif pada uji indole dan methyl red dan negative pada uji Voger Prokauer, dan Citrat. (BPOM RI, 2008)

4.8 Hasil Persiapan Cakram Uji Larutan uji yang akan dibuat terdiri dari tetrasiklin sebagai kontrol positif, fraksi aktif n-heksan, fraksi aktif kloroform, fraksi aktif etanol dan Dimetil Sulfoksida (DMSO) sebagai kontrol negatif. Larutan uji dibuat dengan cara menimbang setiap zat uji dengan dosis 10 gram ekstrak daun rambutan atau setara dengan 6 gram zat uji (Perhitungan terdapat pada Lampiran 17). Zat uji yang telah ditimbang tersebut kemudian dilarutkan dalam Dimetil Sulfooksida sebanyak 1mL.

Tujuan

dilarutkannya

zat

uji

kedalam

DMSO

adalah

untuk

59

menyempurnakan proses difusi zat uji kedalam media. Media EMB merupakan media yang bersifat polar sehingga senyawa yang bersifat non polar tidak dapat terdifusi kedalam media. Larutan uji dibuat dengan 3 kali pengulangan. (Penimbangan terdapat pada Lampiran 18). Cakram yang telah dipotong bulat kemudian direndam dalam larutan uji dan didiamkan selama 10 untuk menyempurnakan proses penyerapan larutan uji kedalam cakram.

4.9 Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri Pengujian aktivitas antibakteri pada fraksi aktif ekstrak etanol daun rambutan dilakukan dengan menggunakan metode difusi cakram. Pengujian ini dilakukan dengan meletakkan cakram uji pada media EMB yang telah diberi 1 mL suspensi bakteri dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 oC. Setelah proses inkubasi selesai, diameter zona hambat pertumbuhan bakteri uji pada media diamati dan diukur menggunakan jangka sorong. Hasil pengamatan uji aktivitas antibakteri fraksi aktif ekstrak daun rambutan terhadap bakteri Escherichia coli terdapat pada tabel 4.4. Tabel 4.4 Hasil Pengamatan Aktivitas Antibakteri Fraksi Aktif Daun Rambutan terhadap bakteri Escherichia coli Diameter Zona Hambat (mm) Perlakuan

Rata-rata ± SD (mm)

Replikasi I

Replikasi II

Replikasi III

27,9

27,75

27,5

27,4167 ± 0,7291

0

0

0

0

Media + bakteri + fase n-heksan

5,25

5,00

4,75

5 ± 1,6949

Media + bakteri + fase kloroform

5,15

5,25

5,15

Media + bakteri + fase etanol

27,75

27,50

28,00

Media + bakteri + Tetrasiklin Media + bakteri + DMSO

5.1833 ± 1,1146 27,75 ± 0,9009

60

Hasil Uji Aktivitas Antibakteri 



a

a

Error Bars show Mean +/- 1.0 SD

Diameter Zona Hamba t

Bars show Means a dan b = Tidak ber beda secara signifikan 20 .0 0

10 .0 0

b



0.00

b 



K ontrol P os iti f Fa se n-Heksa n Fa se E th ano l K ontrol Neg atif Fa se K lo ro fo rm

Fase

Gambar 4.1 Grafik Hasil Uji Aktivitas Antibakteri

Uji KHM dan KBM yang dilakukan oleh Rahayu (2011) menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun rambutan dapat menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli pada dosis 10g simplisia. Hasil pengamatan aktivitas antibakteri fraksi aktif tersebut juga menunjukkan bahwa fraksi aktif dapat menghambat peretumbuhan bakteri Escherichia coli dengan membentuk suatu zona hambat. Fraksi aktif n – heksan menghasilkan zona hambat sebesar 4,75mm sampai 5,25mm dengan rata - rata zona hambat 5mm. Fraksi aktif kloroform menghasilkan zona hambat antara 5,15mm hingga 5,25mm dengan rata - rata zona hambat 5,1833mm. Sedangkan untuk Fraksi aktif etanol menghasilkan zona hambat antara 27,50mm hingga 28,00mm dengan rata - rata zona hambat 27,75mm. Hasil tersebut menunjukkan bahwa fase kloroform dan fase n – heksan memiliki nilai zona hambat yang kurang dari 10 mm. Menurut Greenwood (1995) dalam Pratama (2005), respon hambatan pertumbuhan bakteri dengan diameter

61

zona hambat yang kurang dari 10 mm termasuk dalam katagori kurang kuat. Sedangkan untuk fase etanol memilki zona hambat lebih besar dari 20 mm yang artinya nilai tersebut termasuk kedalam kategori respon hambatan pertumbuhan bakteri yang kuat. Data yang diperoleh kemudian dianalisa menggunakan software SPSS 15 melalui Uji One Way Anova (Data Analisis terdapat dalam Lampiran 22). Dari hasil analisis data menggunakan software tersebut didapatkan nilai sig pada tebel homogeneity of variances adalah 0,219. Besar nilai sig tersebut lebih besar dari (0,05), nilai tersebut menunjukkan bahwa Ho diterima yang artinya sampel memiliki varian data yang sama. Pada tabel ANOVA diperoleh nilai sig (0,000), nilai tersebut lebih kecil dari 0,05 maka Ho ditolak. Hal tersebut menunjukkan bahwa pemberian fraksi aktif ekstrak daun rambutan memberikan pengaruh yang signifikan dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli. Sedangkan dari tabel Post Hoc dapat diketahui apakah terdapat perbedaan aktivitas secara bermakna antar perlakuan yang perbedaannya dapat ditunjukkan dengan adanya tanda (*) yang terdapat pada bagian belakang nilai mean difference. Berdasarkan tabel tersebut dapat diketahui bahwa kontrol positif (Tetrasiklin) memiliki perbedaan yang signifikan terhadap kontrol negatif (DMSO), fase n – heksan dan fase kloroform, akan tetapi tidak memiliki perbedaan yang signifikan terhadap fase etanol. Hal tersebut menunjukkan bahwa fase etanol memiliki aktifitas yang sama dengan tetrasiklin dalam hal menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli. Kontrol negatif yaitu DMSO, memiliki perbedaan yang signifikan terhadap semua perlakuan. Hal tersebut

62

membuktikan bahwa kontrol negatif (DMSO) yang dibuat benar – benar tidak memiliki aktifitas dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli. Fase n-heksan memiliki perbedaan aktivitas yang bermakna dengan fase etanol, kontrol positif (tetrasiklin) dan kontrol negatif (DMSO), akan tetapi tidak memiliki perbedaan yang signifikan terhadap fase kloroform. Begitu pula dengan fase kloroform yang memiliki perbedaan aktivitas yang bermakna dengan fase ethanol, kontrol positif dan kontrol negatif, akan tetapi tidak memiliki perbedaan yang signifikan terhadap fase n – heksan. Hal tersebut membuktikan bahwa fase n- heksan dan fase kloroform memiliki aktifitas yang sama dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli. Aktifitas

yang

sama

dalam

mengahambat

pertumbuhan

bakteri

Escherichia coli, disebabkan karena adanya kedekatan nilai konstanta dielektrikum diantara kedua pelarut tersebut, yaitu antara n – heksan dengan kloroform memiliki selisih konstanta dielektrikum sebesar (2,92), sehingga dimungkinkan senyawa yang terdapat dalam fase n – heksan yaitu seteroid maupun terpeneoid masih terikut dalam fase kloroform yang didalamnya terdapat senyawa alkaloid, terlebih pelarut yang digunakan adalah pelarut teknis, maka pemisahan yang dilakukan kurang maksimal. Golongan senyawa alkaloid merupakan golongan senyawa yang bersifat semipolar, sehingga untuk memkasilmalkan pemisahan senyawa tersebut dapat digunakan pelarut yang memiliki konstanta dielektrikum yang lebih besar dibandingkan dengan konstanta dielektrikum yang dimiliki kloroform, agar rentang konstanta dielektrikum menjadi lebih besar. Contoh pelarut yang dapat digunakan adalah butyl asetat, asam asetat glasial, dan etil asetat.

63

Sedangkan untuk fase etanol memiliki perbedaan aktifitas yang signifikan terhadap fase n - heksan, fase kloroform dan kontrol negatif, akan tetapi tidak memiliki perbedaan yang signifikan terhadap kontrol positif. Hal tersebut membuktikan bahwa fase etanol memiliki aktifitas terhadap bakteri Escherichia coli karena zona hambat yang dihasilkan sama dengan zona hambat yang dihasilkan oleh kontrol positif yaitu Tetrasiklin. Perbedaan yang signifikan antara etanol dengan fase yang lainnya dimungkinkan juga disebabkan karena adanya perbedaan konstanta dielektrikum yang cukup jauh, yaitu antara n – heksan dengan etanol memiliki selisih konstanta dielektrikum sebesar (22,41), sedangkan untuk etanol dengan kloroform memiliki selisih konstanta dielektrikum sebesar (19,49). Besar selisih konstanta dielektrikum antara etanol dengan n –heksan dan kloroform menjadikan senyawa selain yang bersifat polar tidak dapat terikut dalam fase etanol. Selain itu, terlihat dari identifikasi senyawa yang terkandung dalam fase etanol yang menujukkan bahwa fase etanol mengandung lebih banyak golongan senyawa dibandingkan dengan fase lainnya yaitu flavonoid, tannin, saponin. Besarnya diameter zona hambat yang dihasilkan oleh fase etanol tidak menutup

kemungkinan

terdapat

pengaruh

pelarut

dalam

menghambat

pertumbuhan bakteri Escherichia coli, sehingga perlu diberikan kontrol pelarut untuk mengetahui adakah pengaruh dari pelarut yang digunakan.

BAB V PENUTUP

5.1 Kesimpulan Berdasarkan hasil penelitian aktvitas antibakteri fraksi aktif ekstrak etanol daun rambutan (Nephelium lappaceum L.) terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli dengan metode difusi diperoleh kesimpulan bahwa : 1. Fraksi n – heksan, kloroform, dan etanol dari ekstrak etanol daun rambutan memiliki aktivitas terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli 2. Fraksi yang paling aktif dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli adalah fraksi etanol.

5.2 Saran 1. Perlu diberikan kontrol pelarut n – heksan, kloroform, dan etanol pada saat pengujian aktivitas antibakteri 2. Perlu dilakukan observasi eluen pada saat identifikasi menggunakan metode KLT dalam mengidentifikasi senyawa yang terdapat dalam fraksi aktif maupun ekstrak 3. Perlu dilakukan penggunaan pelarut lain dalam proses fraksinasi

64

DAFTAR RUJUKAN

Astaria, N. W.G.1, Astuti, K. W.1 , Warditiani, N. K.1. 2013. Skrining Fitokimia Ekstrak Metanol Rimpang Bangle (Zingiber Purpureum Roxb.). Jurnal Farmasi Udayana Vol 1(1): 1-7

Atlas, Ronald M. 1997. Principles of Microbiology. Second Edition. Iowa: WNC Brown.

Atlas, Ronald M. 2006. Hand Book of Microbiologcal Media for the Examination of Food. Second Editon. Boca Raton: CRC Press Taylor and Francis Group.

Ayuni, N. P., dkk. 2013. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Alkaloid pada Biji Mahoni (Swietenia mahagoni Jacq). Seminar Nasional FMIPA UNDIKSHA III , 387-395.

Badan Pengawas Obat dan Makanan. 2008. Pengujian Mikrobiologi Pangan. Info POM ISSN 1829-9334. Vol 9 (2): 1-12

Barbehenn, Raymond V., and C. Peter Constabel. 2011. Tannins in Plant– herbivore Interactions. Phytochemistry Vol 72 (13): 1551–1651.

Brooks, GF, Butel, JS and Morse, SA. 2007. Mikrobiologi Kedokteran. Edisi 23. Jakarta: Buku Kedokteran EGC.

Cronquist, A. 1981. An Integrated System of Classification of Flowering Plants. New York : Columbia University Press.

Dalimartha, Setiawan. 2005. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 4. Jakarta: Puspa Suara.

Darmawijaya, .2013. Skrinning Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Pancasona (Tinospora Coriaceae Beumee.) Jurnal Virgin, Vol. 1 (1) : 69-74

69

70

Darwis, W., et al. 2013. Uji Efektivitas Ekstrak Rimpang Lengkuas Merah (Alpinia Purpurata K.Schum) Sebagai Antibakteri Escherichia coli Penyebab Diare. Konservasi Hayati Vol. 9 (1) :7-12.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1995. Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1986. Sediaan Galenik. Jakarta: Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan.

Departemen Kesehatan Republik Indodesia. 2000. Parameter Standard Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta: Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan.

Departemen Kesehatan RI. 2011. Buku Saku Petugas Kesehatan. Jakarta: Departemen Kesehatan RI.

Djojopranoto, Riana Rahmawati. 2013. Daya Perendam Radikal Bebas Ekstrak Etanol Daun Jambu Mente (Anacardium ocidentale L.) terhadap DPPH. Jurnal Ilmiah Mahasiswa Universitas Surabaya. Vol 2 (2): 1-10 Dwiyanti, W., dkk. 2014. Pengaruh Ekstrak Daun Kenikir (Cosmos caudatus) terhadap Pertumbuhan Bakteri Bacillus cereus secara In Vitro. LenteraBio Vol. 3 (1) :1-5.

Dzen Sjoekoer M., Roektiningsih, Sanarto., Sri W. 2003. Bakteriologi Medik. Jakarta: Bayumedia Publishing.

Farnswoth., Norman N. 1966. Biological and Phytochemical Screening of Plants. Journal of Pharmaceutical Sciences. Vol 55 (3): 225–276

Febriyanti, M., dkk. 2013. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol dan Fraksi-Fraksi Daun Ekor Kucing (Acalypha Hispida Burm. F) dengan Metode Penghambatan Reduksi Water Soluble Tetrazolium Salt-1 (Wst-1). Fitofarmaka Vol 3(2): 1-6.

Guenther, E. 1987. Minyak Atsiri. Jilid I. Jakarta: Universitas Indonesia.

71

Gupita, C. N. dan A. Rahayuni. 2012. Pengaruh Berbagai pH Sari Buah dan Suhu Pasteurisasi Terhadap Aktivitas Antioksidan dan Tingkat Penerimaan Sari Kulit Buah Manggis. Journal of Nutrition College Vol. 1(1): 67- 79. Greig, Ederson. 2014. What is Astringency in Wine?. Phytochemistry Vol 4 (3): 1233–1265

Handayani, D., N. Sayuti dan Dachriyanus. 2008. Isolasi dan Karakterisasi Senyawa Antibakteri Epidioksi Sterol dari Spon Laut Petrosia nigrans, Asal Sumatra Barat. Prosising Seminar Nasional Sains dan Teknologi - II. Lampung: Universitas Lampung

Harborne, J. B. Metode Fitokimia. Terjemahan oleh Padmawinata K, Soediro I; Niksolihin S. 1987. Bandung: ITB.

Hariana, A. 2006. Tumbuhan Obat. Jakarta: Penebar Swadaya.

Hostettmann, K., and A. Marston. 1995. Saponins Chemistry and Pharmacology of Natural Products. Cambridge: University Press.

Inayah, F. 2011. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid dari Tanaman Anting-Anting (Acalypha indica Linn.). Skripsi. Malang: Universitas Islam Negri Malang .

Inayati, H. 2007. Potensi Antibakteri Ekstrak Daun Kedondong Bangkok (Spondias dulcis Forst.). Skripsi Tidak Diterbitkan. Bogor: Institut Pertanian Bogor.

Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA. 1996. Mikrobiologi Kedokteran. Edisi Keduapuluh. Terjemahan oleh Nugroho E, Maulany FR. Jakarta: Buku Kedokteran EGC.

Katno. 2008. Tingkat Manfaat Keamanan dan Efektifitas Tanaman Obat dan Obat Tradisional. Karanganyar: Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan Obat Tradisional Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Departemen Kesehatan RI.

72

Kibbe, A.H., PhD. 2000. Handbook of Pharmaceutical Excipients. 3rd Edition.. London: The Pharmaceutical Press

Krieg,

N.R and Holt. J.G. 1984. Bergey’s Bacteriology. Volume 1. USA: Baltimore

Manual of

Systematic

Kusniadi, dkk.2003. Mikrobiologi. Bandung: JICA IMSTEP.

Kusumaningrum, A., et al. 2013. Penurunan Total Bakteri Daging Ayam dengan Perlakuan Perendaman Infusa Daun Salam (Syzygium polyanthum). Jurnal MIPA Vol 36(1): 14-19.

Lenny, S. 2006. Senyawa Flavonoida, Fenil Propanoida, dan Alkaloida. Karya Tulis Ilmiah. Medan: Universitas Sumatra Utara Medan

Mailoa, M. N., et al. 2014. Effectiveness of Tannins Extract From Leaf Guava (Psidium guajava L) on the Growth and Damage of Cell Morphology Escherichia coli. International Journal of Advanced Research Volume 2(1): 908-914.

Maradona, D. 2013. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Durian (Durio zibethinus L), Daun Lengkeng (Dimocarpus longan Lour), dan Daun Rambutan (Nephelium lappaceum L) terhadap Bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25925 dan Escherichia coli ATCC 25922. Karya Tulis Ilmiah tidak diterbitkan. Jakarta: UIN Syarif Hidayatullah

Mulyani, P. R. 2007. Aktivitas Antibakteri Rimpang Temu Putih (Curcuma mangga Vall). Jurnal Sains dan Matematika (JSM) Vol 15(2): 89-93.

Ngajow, M., et al. 2013. Pengaruh Antibakteri Ekstrak Kulit Batang Matoa (Pometia pinnata) terhadap Bakteri Staphylococcus aureus secara In Vitro. Jurnal Mipa Unsrat Online 2 (2) :28-132. Nuraini, . 2012. F. 2002. Isolasi dan Identifikasi Tanaman dari Daun Gamal (Gliricidia seium (jackquin) Kunth ex Walp. Skripsi Tidak Diterbitkan. Malang: Jurusan Kimia FMIPA Universitas Brawijaya

73

Pelezar, M.J. dan E.C.S. Chan. 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi Jilid I. Jakarta: UI Press.

Pratama, Rachdie M. 2005. Pengaruh Ekstrak Serbuk Kayu Siwak (Salvadora persica) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Streptococcus mutans dan Staphylococcus aureus dengan Metode Difusi Agar. Skripsi. Surabaya: Biologi FMIPA Institut Teknologi Sepuluh November

Pratiwi, S.T., 2008. Mikrobiologi farmasi. Jakarta: Erlangga

Rahayu, T. 2012. Efektivitas Daun Rambutan (Nephellium luppericum) sebagai Antibakteri terhadap Bakteri Escherichia coli. Karya Tulis Ilmiah tidak diterbitkan. Malang: Akademi Analis Farmasi dan Makanan Putra Indonesia Malang.

Retnowati, Y., dkk. 2011. Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus Aureus pada Media yang Diekspos Dengan Infus Daun Sambiloto (Andrographis Paniculata). Jurnal Saintek. Vol 6 (2): Tidak ada halaman

Rijayanti, R. P. 2014. Uji aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Mangga Bacang (Mangifera Foetida L.) terhadap Staphylococcus aureus secara In Vitro. Naskah Publbikasi. Pontianak: Universitas Tanjungpura Fakultas Kedokteran

Rohmanto, dkk. 2014. Pengaruh Ekstrak Metanol Daun Sanseviera (Sansiviera trifasciata var. Laurentii) terhadap Penghambatan Pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Escherichia coli secara In Vitro. Penelitian: 19.

Rohyami, Y. 2008. Penentuan Kandungan Flavonoid dari Ekstrak Metanol Daging Buah Mahkota Dewa. Jurnal Penelitian dan Pengabdian Vol 5(1): 1-16.

Saleh, M., dkk. 2015. Determinasi dan Morfologi Buah Eksotis Potensial di Lahan Rawa. Penelitian Vol 1(1):73-92.

Septiana, A. T., et al. 2013. Aktivitas Antioksidan Ektrak Rumput Laut Sargassum duplicatum. Jurnal Teknologi Pertanian Vol. 14(2): 79-86.

74

Siregar, A. F., dkk. 2012. Potensi Antibakteri Ekstrak Rumput Laut Terhadap Bakteri Penyakit Kulit Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus epidermidis, dan Micrococcus. Journal Of Marine Research Vol 1 (2): 152-160.

Sudarmadji, S., dkk. 1997. Prosedur Analisis untuk Bahan Makanan dan Pertanian. Yogyakarta: Liberty

Sudarmadji, S., dkk. 2007. Analisa Bahan Makanan dan Pertanian. Liberty: Yogyakarta. Tang, M., dkk. 2011. Pengaruh Penambahan Pelarut Organik Terhadap Tegangan Permukaan Larutan Sabun. Prosiding Simposium Nasional Inovasi Pembelajaran dan Sains: 1-7.

Tjandra, O., dkk. 2015. Uji Aktivitas Antioksidan dan Profil Fitokimia Kulit Rambutan Rapiah (Nephelium lappaceum). Penelitian, 1-13.

Vernanda, S. G., et al. 2015. Karateristik pada Balita Diare dengan Infeksi Enteropathogenic Escherichia coli di Puskesmas Rawat Inap Kota Pekanbaru. JOM FK Vol 2(1): 1-7.

Volk, Wesley A dan Margareth F. Wheeler., 1998. Mikrobiologi Dasar. Jilid I. Edisi 5. Jakarta: Erlangga

Wienarno, et al. 1997. Efek Daun Katu (Saurophus androgenus Merr.) terhadap Diare tikus putih. Cermin Dunia Farmasi. Vol 33: 31-35.

Wijaya, V., et al. 2013. Daun Tendani (Goniothalamus macrophyllus Hook. F. &Thomson.), Suatu Obat Tradisional Antibakteri Suku Dayak Punan Di Kalimantan Timur. Fitofarmaka Vol 3(2): 2087-9164.

Wijono, S. H. 2003. Isolasi Dan Identifikasi Flavonoid pada Daun Katu (Sauropus Androgynus (L.) Merr). Makara, Sains Vol 7 (2): 51-64.

LAMPIRAN Lampiran 1. Pemilihan Daun Muda

Daun Tua

Daun Muda

Lampiran 2. Hasil Determinasi tanaman Rambutan (Nephelium lappaceum L.)

75

76

Lampiran 3. Proses Pembuatan Simplisia

Daun Segar

Simplisia

Lampiran 4 Pembuatan Serbuk Simplisia Daun Rambutan

Lampiran 5. Penimbangan Serbuk Simplisia untuk Proses Maserasi

Lampiran 6 Proses Maserasi

77

Lampiran 7. Penyaringan Hasil Maserasi

Lampiran 8. Rendemen Ekstrak Daun Rambutan Ekstrak 1 = Ekstrak 2 = Ekstrak 3 =

31,0513 g 50 𝑔 38,0421 g 50 𝑔 20,7891 g 50 𝑔

𝑥 100 = 62,1026% 𝑥 100 = 76,0842% 𝑥 100 = 41,5782%

Lampiran 9. Proses Penguapan Etanol Dari Maserat menggunakan Rotary Evaporator

Lampiran 10. Proses Pengentalan Ekstrak menggunakan Waterbath

78

Lampiran 11. Proses Fraksinasi Ekstrak

1

Proses penambahan Etanol

2

Fase nheksan

3

Fase Kloroform

4

Hasil fraksinasi

5

Pemekatan tiap fase n – heksan

79

Klororform

etanol

Lampiran 12 Perhitungan Rendemen tiap Fraksi Fraksi n-heksan

=

Fraksi kloroform

=

Fraksi etanol

=

19,1785 g 50 𝑔 6,5912 g 50 𝑔 23,3170 g 50 𝑔

𝑥 100 = 38,1909% 𝑥 100 = 13,1253% 𝑥 100 = 46,4320%

Lampiran 13. Hasil Uji Kualitatif Ekstrak dan Fraksi Aktif Daun Rambutan

1

Eluasi eluen

2

Saponin

80

3

Flavonoid

4

Steroid dan Terpenoid

81

Ekstrak

5

Alkaloid

Fraksi n-heksan

82

6

Tanin

83

Lampiran 14. Pembiakan dan Isolasi Bakteri

Lampiran 15. Pembuatan Suspensi Bakteri

Lampiran 16. Hasil Identifikasi Bakteri

84

Lampiran 17. Hasil Perhitungan Dosis 10 g untuk Larutan Uji 10g x Berat rata − rata ekstrak bobot simplisia awal 10g = x 29,96 = 5,9992 → 6g 50 g

Lampiran 18. Penimbangan Bahan untuk Larutan Uji Fase n-

Fase

heksan

Klororform

6,0240 g

6,0114 g

6,3001

0,6263 g 0,0741 g

Tetrasiklin

Ekstrak

6,0151 g

Fase Etanol

DMSO

6,0199 g

1mL

6,0440 g

6,0793 g

1mL

6,0263 g

6,0349 g

1mL

Lampiran 19. Perendaman Kertas Cakram pada Larutan Uji

Lampiran 20. Proses Pengujian Aktivitas Antibakteri

Pemberian 1 mL Suspensi Bakteri

Fase n-heksan

Fase Kloroform

85

Fase Etanol

Ektrak

Tetrasiklin

DMSO

Pembungkusan Kontrol Media

Lampiran 21. Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri

Tetrasikli n T1

T2

T3

D1

D2

D3

n1

n2

n3

DMSO

Fase nheksan

86

Fase Klorofor m K1

K2

Fase Etanol

Kontrol Media

Lampiran 22. Hasil Analisis Data One Way Anova

K3

87

AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI N-HEKSAN, KLOROFORM, DAN ETANOL DARI EKSTRAK ETANOL DAUN RAMBUTAN

Recommend Documents