AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL BUAH ADAS (Foeniculum vulgare Mill) TERHADAP Staphylococcus epidermidis, Shigella sonnei ATCC 9290, DAN Citrobacter diversus
NASKAH PUBLIKASI
Oleh :
ARIESTA SURYA PERWITASARI K 100 080 143
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA SURAKARTA 2012
PENGESAHAN NASKAH PUBLIKASI Berjudul: 'i
AKTTVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL BUAH ADAS (Foeniculum valgare Mill.) TERIIADAP Stnphylococcusepidermidis,Shigellu sonnei ATCC 9290,DAN Citrobacter diversus Oleh: ARIESTA SURYA PERWITASARI K 100080 143 Dipertahankan di hadapan Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Muhammadryah Surakarh Pada Tanggal:30 Juni 2012 Mengetahui,
Farmasi iyah Surakarta
Penguji II
't [^^t J?.\^Ika TrisharyantiD K M.Farm,.Apt
Rima Munawaroh, M.Scn Apt Mahasiswa
Ariesta Surya Penvitasari
AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL BUAH ADAS (Foeniculum vulgare Mill.) TERHADAP Staphylococcus epidermidis, Shigella sonnei ATCC 9290, DAN Citrobacter diversus ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF ETHANOL EXTRACT OF FENNEL FRUIT (Foeniculum vulgare Mill.) AGAINTS Staphylococcus epidermidis, Shigella sonnei ATCC 9290, AND Citrobacter diversus Ariesta Surya Perwitasari, Peni Indrayudha, dan Rima Munawaroh Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta Jl. A Yani Tromol Pos I, Pabelan Kartasura Surakarta 57102 ABSTRAK Tanaman adas merupakan salah satu tanaman yang dapat digunakan sebagai obat. Buah adas dapat digunakan sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol buah adas (Foeniculum vulgare Mill.) yang telah disimpan selama 1 tahun terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis, Shigella sonnei ATCC 9290, dan Citrobacter diversus. Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi Kirby Bauer. Ekstrak etanol buah adas diujikan pada bakteri dengan seri konsentrasi ekstrak 0,5 mg, 1 mg, 2 mg, dan 3 mg per disc untuk bakteri Citrobacter diversus. Sedangkan uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dan Shigella sonnei ATCC 9290 menggunakan seri konsentrasi ekstrak 5 mg, 6 mg, 7 mg, dan 8 mg per disc. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol buah adas mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Citrobacter diversus dengan zona hambat paling besar pada konsentrasi ekstrak 1 mg per disc dengan diameter zona hambat ratarata sebesar 16 mm. Ekstrak etanol buah adas tidak mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis dan Shigella sonnei ATCC 9290. Kata kunci : Foeniculum vulgare Mill, Staphylococcus epidermidis, Shigella sonnei, Citrobacter diversus, antibakteri ABSTRACT Fennel plant is one plant that can be used as a medicine. Fennel fruit can be used as an antibacterial. This research aims to know the antibacterial’s activity of ethanol extracts of fennel fruit (Foeniculum vulgare Mill.) that had been stored for one year against the bacteria Staphylococcus epidermidis, Shigella sonnei ATCC 9290, and Citrobacter diversus. Antibacterial activity assay uses Kirby Bauer diffusion method. Ethanol extracts of fennel fruits was tested on a series of bacterial extract concentration of 0.5 mg, 1 mg, 2 mg and 3 mg per disc for bacteria Citrobacter diversus. While assay the antibacterial activity against Staphylococcus epidermidis bacteria and Shigella sonnei ATCC 9290 used a series of extract concentrations of 5 mg, 6 mg, 7 mg, and 8 mg per disc.
1
The results showed that ethanol extracts of fennel fruit had antibacterial activity against Citrobacter diversus with the greatest inhibition zones at concentrations of 1 mg of extract per disc with a diameter of inhibition zone by an average of 16 mm. Ethanol extracts of fennel fruit had no antibacterial activity against Staphylococcus epidermidis and Shigella sonnei ATCC 9290. Keywords : Foeniculum vulgare Mill, Staphylococcus epidermidis, Shigella sonnei, Citrobacter diversus, antibacterial PENDAHULUAN Penyakit infeksi masih merupakan jenis penyakit yang paling banyak diderita oleh penduduk di negara Indonesia. Salah satu penyebab penyakit infeksi adalah bakteri (Radji, 2011). Istilah infeksi menggambarkan pertumbuhan atau replikasi mikroorganisme di dalam tubuh inang. Penyakit timbul bila infeksi menghasilkan perubahan pada fisiologi normal tubuh (Pratiwi, 2008). Kondisi tertentu, apabila bakteri masuk ke dalam bagian tubuh lain, bakteri enterik dapat menyebabkan penyakit pada jaringan tubuh manusia. Contoh bakteri yang sering menyebabkan infeksi adalah Staphylococcus epidermidis, Citrobacter diversus, dan Shigella sonnei. Infeksi Staphylococcus epidermidis dapat menyebabkan infeksi kulit yang disertai dengan pembentukan abses (Radji, 2011). Citrobacter diversus merupakan penyebab abses otak yang penting (Arvin, 2000). Citrobacter diversus juga dapat menyebabkan infeksi saluran urin dan sepsis (Jawetz dkk., 2005). Infeksi Shigella sonnei menyebabkan disentri (Gould dan Brooker, 2003). Beberapa tahun terakhir telah banyak dikembangkan tanaman sebagai antibakteri. Salah satu tanaman tersebut adalah tanaman adas (Foeniculum vulgare Mill). Bagian tanaman adas yang sering dimanfaatkan oleh masyarakat adalah buahnya dengan komponen minyak atsiri sebesar 2-6%. Minyak dari buah adas (minyak adas, fennel oil) berkhasiat sebagai stimulan, karminatif, antibakteri, dan antelmintik (Anonim, 2006). Penelitian yang dilakukan Gulfraz dkk. (2008) menunjukkan bahwa ekstrak metanol buah adas, ekstrak etanol buah adas, dan minyak adas dengan konsentrasi ekstrak 100 µg/disc mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Escherichia coli dengan diameter zona hambat masing-masing 14 mm, 12 mm, dan 16 mm. 2
Aktivitas antibakteri ekstrak buah adas ini lebih rendah dibandingkan minyak adas. Penelitian Kaur dan Arora (2009) menyebutkan ekstrak air panas biji adas dan ekstrak aseton biji adas menunjukkan aktivitas antibakteri yang lebih baik daripada ekstrak air mendidih biji adas dan ekstrak heksan biji adas terhadap bakteri Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella typhi, Salmonella typhimurium 1, Salmonella typhimurium 2, dan Shigella flexneri. Penelitian lain yang dilakukan Saeidi dkk. (2010) menyatakan bahwa ekstrak etanol Foeniculum vulgare dapat menghambat pertumbuhan bakteri Bacilus subtillis PTCC 1023 dan Escherichia coli PTCC 1330 dengan nilai MIC (Minimum Inhibition Concentration) sebesar 125 mg/mL untuk bakteri Bacillus subtilis, 250 mg/mL untuk bakteri Aspergillus niger, dan 125 mg/mL untuk bakteri Cladosporium cladosporioides.
METODE PENELITIAN Alat dan Bahan Alat-alat yang digunakan yaitu : autoklaf, oven, tabung reaksi, cawan petri, ose, gelas Beaker, gelas ukur, mikropipet, inkubator, blue tips, yellow tips, batang pengaduk, lampu bunsen, dan Laminar Air Flow (LAF). Bahan-bahan yang digunakan yaitu : Staphylococcus epidermidis dan Citrobacter diversus yang diperoleh dari Fakultas Kedokteran, Shigella sonnei ATCC 9290 diperoleh dari Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta, ekstrak etanol buah adas (Foeniculum vulgare Mill.) yang telah disimpan dalam kotak pengering selama 1 tahun, dalam berbagai konsentrasi (5%, 10%, 20%, 30%, 50%, 60%, 70%, dan 80%), DMSO (dimetil sulfoksida), media Mueller Hinton (MH), media Brain Heart Infusion (BHI), disc antibiotik (Siprofloksasin), standar Mc. Farland 108 CFU/mL, dan larutan NaCl 0,9%.
3
Cara Penelitian Sterilisasi Alat dan Bahan Alat-alat gelas berupa tabung reaksi, Erlenmeyer, gelas Beaker, cawan petri dimasukkan ke dalam oven (disebut juga pemanasan kering) dan disterilkan pada suhu 170°C selama kurang lebih 1 jam. Alat dan bahan yang tidak tahan pemanasan kering seperti media, yellow tips, blue tips dimasukkan dalam autoklaf (pemanasan basah) pada suhu 121°C selama 15 menit. Pembuatan Media Media yang digunakan telah tersedia dalam kemasan dan pembuatannya sesuai dengan instruksi yang terdapat dalam masing-masing kemasan. Pembuatannya hanya dengan melarutkan bahan media ke dalam akuades sambil dipanaskan untuk membantu kelarutannya, kemudian disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit, dituang ke dalam tabung reaksi atau cawan petri, dan didiamkan pada suhu kamar hingga memadat. Pengecatan Gram Bakteri Koloni bakteri diambil menggunakan mata ose dan diratakan pada gelas obyek kemudian dipanasi di atas nyala bunsen sampai kering. Selanjutnya gelas obyek ditetesi formalin 1% ditunggu beberapa menit kemudian dikeringkan lagi dan preparasi siap dicat. Preparat yang telah siap dicat digenangi dengan cat gram A selama 1–3 menit kemudian digenangi cat gram B selama 0,5–1 menit, setelah itu cat dibuang dan dicuci dengan air. Preparat kemudian ditetesi cat gram C sampai warna cat dilunturkan. Setelah itu preparat digenangi cat gram D selama 1–2 menit kemudian dicuci dan dikeringkan dalam udara kamar. Gelas obyek ditutup menggunakan deg glass dan ditetesi 1 tetes imersi. Preparat siap diperiksa di bawah mikroskop dengan pembesaran 100x. Identifikasi Bakteri Secara Biokimia a) Identifikasi Bakteri Staphylococcus epidermidis Bakteri ditusukkan pada media MSA (manitol salt agar) dan kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 18-24 jam.
4
b) Identifikasi Bakteri Shigella sonnei dan Citrobacter diversus Bakteri ditusukkan pada media miring KIA, LIA, dan MIO, kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 18-24 jam. Pembuatan Seri Konsentrasi Ekstrak etanol buah adas (Foeniculum vulgare Mill.) dibuat seri konsentrasi 5%, 10%, 20%, 30%, 50%, 60%, 70%, dan 80%. Masing-masing konsentrasi ekstrak dibuat dengan cara menimbang ekstrak sebanyak 0,05 gram, 0,1 gram, 0,2 gram, 0,3 gram, 0,5 gram, 0,6 gram, 0,7 gram, dan 0,8 gram. Ekstrak yang sudah ditimbang kemudian ditambahkan DMSO sampai 1 mL. Penyiapan Bakteri Uji Bakteri ditanam di media Mueller Hinton (MH) dan diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37°C, kemudian disimpan pada suhu 4°C sebagai stok bakteri. Sedikitnya 3-5 koloni bakteri dari media Mueller Hinton (MH) dipindahkan ke dalam 4-5 mL BHI, kemudian diinkubasi pada suhu 37°C sampai mencapai standar Mc. Farland (biasanya 2-6 jam). Mikroba uji disamakan dengan standar Mc. Farland dengan ditambahkan larutan salin. Preparasi Paper Disc Paper disc masing-masing diberi 10 µL ekstrak etanol buah adas dengan konsentrasi 5%, 10%, 20%, 30%, 50%, 60%, 70%, dan 80% atau sama dengan 0,5 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, dan 8 mg per disc. Sebagai kontrol positif digunakan disc antibiotik (5 µg siprofloksasin) yang dapat menghambat bakteri Staphylococcus epidermidis, Shigella sonnei ATCC 9290, dan Citrobacter diversus. Sebagai kontrol negatif, paper disc diberi 10 µL DMSO (dimetil sulfoksida). Paper disc kemudian dibiarkan pada suhu kamar di Laminar Air Flow (LAF) selama 5-10 menit. Uji Aktivitas Antibakteri dengan Metode Difusi Kirby-Bauer Masing-masing cawan petri diisi media Mueller Hinton (MH) cair 20 mL yang telah disterilkan, kemudian dipadatkan. Selanjutnya jika media MH telah padat, diberi 200 µL suspensi bakteri yang telah dibuat setara dengan 108CFU/mL, diratakan dengan spreader glass, kemudian diletakkan paper disc yang telah diisi ekstrak etanol buah adas, antibiotik (Siprofloksasin), dan DMSO di atas media
5
MH. Media MH dibiarkan selama 15 menit pada suhu kamar. Kemudian diinkubasi pada suhu 37°C, selama 18-24 jam dengan posisi cawan petri dibalik. Analisis Data Data diperoleh dengan melakukan pengukuran zona hambat di sekitar disc setelah diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37°C. Diamati ada tidaknya zona radikal atau zona iradikal di sekitar paper disc.
HASIL DAN PEMBAHASAN Identifikasi Bakteri Identifikasi bakteri dengan pewarnaan Gram bertujuan untuk menggolongkan bakteri yang digunakan termasuk ke dalam kelompok bakteri Gram positif atau Gram negatif. Hasil pengecatan menunjukkan bakteri Citrobacter diversus berbentuk batang, pendek, susunan tunggal dan berwarna merah. Sedangkan Shigella sonnei ATCC 9290 mempunyai bentuk batang, panjang, susunannya tunggal, dan berwarna merah. Kedua bakteri ini termasuk bakteri Gram negatif dengan ditunjukkan bakteri berwarna merah ketika diamati di bawah mikroskop. Bakteri Gram negatif mempunyai kadar lipid yang tinggi di dalam dinding sel. Zat lipid ini akan larut selama pencucian dengan alkohol dan pori-pori pada dinding sel membesar sehingga zat warna yang sudah diserap akan dilunturkan, kuman menjadi transparan. Selain itu, bakteri Gram negatif mempunyai lapisan peptidoglikan yang tipis sehingga permeabilitas dinding sel lebih besar dan memungkinkan untuk melepaskan kompleks ungu kristal-iodin (Anonim, 1993). Bakteri Staphylococcus epidermidis berbentuk bulat, berkelompok, dan berwarna ungu sehingga termasuk ke dalam bakteri Gram positif. Bakteri Gram positif mengalami denaturasi protein pada dinding selnya dengan adanya pencucian menggunakan alkohol. Protein menjadi keras dan beku, pori-pori mengecil sehingga kompleks ungu kristal-iodin dipertahankan dan sel bakteri tetap berwarna ungu. Lapisan peptidoglikan yang tebal sehingga permeabilitas dinding sel menjadi berkurang dan kompleks ungu kristal-iodin tidak dapat keluar (Anonim, 1993).
6
Identifikasi bakteri secara biokimiawi, bakteri Staphylococcus epidermidis menggunakan media MSA (Manitol Salt Agar) membentuk zona merah dan koloni berwarna putih. Warna merah pada media MSA disebabkan bakteri S. epidermidis tidak memfermentasi manitol (Lay, 1994). Bakteri Shigella sonnei ATCC 9290 ditanam pada media KIA (Kliger Iron Agar) diperoleh hasil S. sonnei ATCC 9290 dapat memfermentasi glukosa dan membentuk suasana asam. S. sonnei tidak memproduksi H2S yang ditandai dengan tidak terbentuknya warna hitam pada media KIA. Pada media LIA (Lysine Iron Agar), terlihat bagian miring media membentuk suasana alkali yang ditandai media berwarna ungu. Sedangkan di bagian tegak terjadi perubahan warna dari ungu menjadi kuning, yang berarti membentuk suasana asam dan bakteri mampu memfermentasi glukosa. Pada media MIO (Motility Indole Ornithine) dapat dilihat tidak terjadi pergerakan bakteri S. sonnei ATCC 9290 dan media bagian bawah berubah warna dari ungu menjadi kuning yang berarti reaksi dekarboksilasi ornitin negatif dan tidak menghasilkan cincin merah setelah ditambah dengan reagen Kovack yang berarti reaksi indol negatif. Hasil uji identifikasi biokimia S. sonnei ATCC 9290 sesuai dengan teori, yaitu bakteri Shigella bersifat nonmotil, tidak memfermentasi laktosa, dan tidak memproduksi H2S (Jawetz dkk., 2005). Bakteri Citrobacter diversus ditanam pada media KIA, diperoleh hasil bagian tegak media membentuk suasana asam dan bakteri dapat memfermentasi laktosa ditunjukkan perubahan media dari warna merah menjadi kuning. Sedangkan pada media LIA, bagian miring membentuk suasana alkali yang ditandai warna media tetap ungu. Bagian tegak media LIA membentuk suasana asam dengan adanya perubahan warna media dari ungu menjadi kuning. Pada media MIO, terjadi perubahan warna media dari ungu menjadi kuning yang artinya tidak dapat mendekarboksilasi ornitin dan reaksi indol negatif. Selain itu, pada daerah tusukan terlihat keruh dan melebar, yang berarti bakteri yang diuji dapat bergerak. Hasil uji identifikasi bakteri secara biokimia menunjukkan bahwa uji biokimia tersebut positif untuk bakteri Citrobacter diversus karena bakteri mampu memfermentasi laktosa secara lambat pada media KIA (Jawetz dkk., 2005).
7
Uji Aktivitas Antibakteri Uji aktivitas antibakteri merupakan suatu metode pengujian untuk mengetahui kemampuan suatu bahan dalam menghambat pertumbuhan bakteri. Pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol buah adas dilakukan terhadap bakteri S. epidermidis, S. sonnei ATCC 9290, dan Citrobacter diversus menggunakan metode difusi Kirby Bauer. Area jernih mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan mikroorganisme (Pratiwi, 2008). Penelitian ini menggunakan dua kontrol, yaitu kontrol positif dan kontrol negatif. Kontrol positif berupa disc antibiotik siprofloksasin (5 µg/disc) yang termasuk antibiotik golongan kuinolon dan bisa digunakan untuk membunuh kuman Gram positif dan Gram negatif. Antibiotik ini bekerja dengan menghambat enzim DNA gyrase sehingga menghambat sintesa DNA kuman (Anonima, 2008). Kontrol positif digunakan untuk mengetahui perbedaan daya hambat terhadap ekstrak buah adas. Kontrol negatif berisi 10 µL DMSO 100%. Penggunaan kontrol negatif bertujuan untuk memastikan bahwa diameter zona hambat ekstrak yang dihasilkan bukan pengaruh dari pelarut tapi murni dari senyawa aktif dalam ekstrak tersebut. Tabel 1. Hasil uji aktivitas antibakteri terhadap S. epidermidis, S. sonnei ATCC 9290, dan Citrobacter diversus Konsentrasi (mg/disc) Rata-rata Diameter Zona Hambat (mm) ± SD terhadap S. epidermidis S. sonnei ATCC 9290 Citrobacter diversus 0,5 13 ± 0 1 16 ± 0,5 2 14,2 ± 0,3 3 12 ± 0 5 6±0 6±0 6 6±0 6±0 7 6±0 6±0 8 6±0 6±0 Kontrol (+) 24,2 ± 0,3 22,5 ± 0 24,2 ± 0,8 Kontrol (-) 6±0 7* ± 0 6±0 Keterangan : Tanda * = zona hambat irradikal Tanda = tidak diujikan Kontrol (+) = disc antibiotik siprofloksasin (5µg/disc) Kontrol (-) = disc berisi DMSO SD = Standart Deviasi Data diambil dengan menghitung diameter disc (6mm) dan zona hambat
8
Ekstrak etanol buah adas dengan seri konsentrasi besar, yaitu 5 mg, 6 mg, 7 mg, dan 8 mg/disc diujikan pada bakteri S. epidermidis dan S. sonnei ATCC 9290 ternyata tidak bisa menghambat kedua bakteri tersebut (Gambar 1 dan 2, Tabel 1). Pada uji antibakteri terhadap bakteri S. sonnei ATCC 9290, terdapat zona hambat irradikal di daerah disc kontrol negatif yang berisi pelarut DMSO. Hal ini bisa terjadi dikarenakan pelarut DMSO bersifat bakteriostatik, yaitu menghambat pertumbuhan bakteri (Anonimb, 2008).
Gambar 1. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol buah adas (Foeniculum vulgare Mill.) terhadap S. epidermidis
Gambar 2. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol buah adas (Foeniculum vulgare Mill.) terhadap S. sonnei
Pada uji bakteri Citrobacter diversus, ekstrak etanol buah adas konsentrasi 0,5 mg, 1 mg, 2 mg, dan 3 mg/disc bisa menghambat bakteri Citrobacter diversus. Berdasarkan Tabel 1 maka dapat diketahui bahwa konsentrasi ekstrak buah adas yang paling efektif mampu menghambat pertumbuhan bakteri Citrobacter diversus adalah konsentrasi 1 mg/disc yang mempunyai zona hambat rata-rata 9
paling besar, yaitu sebesar 16 mm. Jika dibandingkan dengan konsentrasi 2 mg/disc dan 3 mg/disc, konsentrasi 1 mg/disc merupakan konsentrasi terkecil yang paling efektif menghambat pertumbuhan bakteri Citrobacter diversus (Gambar 3). Menurut Husna (2007) bahan antimikroba yang baik adalah bahan yang dalam konsentrasi rendah dapat membunuh bakteri yang banyak tersedia dalam jumlah besar. Terbentuknya zona hambat di sekitar disc membuktikan bahwa ekstrak buah adas dapat bersifat antibakteri terhadap bakteri Citrobacter diversus.
Gambar 3. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol buah adas (Foeniculum vulgare Mill.) terhadap Citrobacter diversus
Konsentrasi ekstrak 1 mg/disc pada uji antibakteri terhadap Citrobacter diversus mempunyai zona hambat paling besar dibandingkan konsentrasi 0,5 mg, 2 mg, dan 3 mg/disc. Menurut Husna (2007) kemungkinan hal ini dikarenakan konsentrasi ekstrak yang tinggi berpengaruh pada proses difusi ekstrak ke media agar. Konsentrasi ekstrak yang tinggi memperkecil daya serap ekstrak pada media yang ditumbuhi bakteri, sehingga pengaruh ekstrak kurang meluas dan zona hambat yang dihasilkan kecil. Selain itu, variasi ukuran zona hambat tergantung pada beberapa faktor, antara lain media yang digunakan, kondisi inkubasi, pH, penyebaran ekstrak pada media, derajat kerentanan bakteri terhadap ekstrak yang diberikan, jumlah bakteri yang diinokulasi pada plat agar, dan tingkat pertumbuhannya (Anonim, 2012).
10
Pada penelitian ini dapat dinyatakan bakteri Gram negatif lebih mudah dibunuh daripada bakteri Gram positif, tetapi tidak semua bakteri Gram negatif bisa dihambat. Ekstrak etanol buah adas lebih efektif sebagai antibakteri ketika diujikan pada bakteri Citrobacter diversus daripada diujikan pada bakteri S. sonnei. Penelitian Majid dkk. (2010) menyatakan bahwa ekstrak hidroalkohol buah adas lebih efektif membunuh bakteri Gram negatif. Penelitian Kaur dan Arora (2009) juga menyebutkan bahwa ekstrak alkaloid dan tanin dari buah adas mempunyai zona hambat yang lebih besar terhadap bakteri Gram negatif (Pseudomonas aeruginosa dan Shigella flexneri) dibandingkan bakteri Gram positif (Staphylococcus aureus). Hal ini didukung penelitian yang dilakukan Purnami (2012) yang menyebutkan bahwa ekstrak etanol buah adas mampu menghambat bakteri Gram negatif, yaitu Pseudomonas aeruginosa dan Proteus mirabilis. Shigella sonnei mempunyai antigen yang lebih komplek dibandingkan Citrobacter diversus. Shigella sonnei mempunyai antigen somatik (O), antigen flagel (H), dan antigen kapsul (K). Antigen O terdiri dari lipopolisakarida, antigen H terdiri dari protein, dan antigen K terdiri dari polisakarida (Jawetz, 2005). Sedangkan Citrobacter diversus hanya mempunyai antigen O dan antigen H (Sechter dkk., 1981). Perbedaan antigen Shigella sonnei dan Citrobacter diversus yang kemungkinan menyebabkan Shigella sonnei lebih susah untuk dihambat pertumbuhannya. Maryati (2007) menyebutkan bahwa tebal tipisnya peptidoglikan dalam dinding sel berpengaruh terhadap permeabilitas dinding sel. Bakteri Gram positif mempunyai susunan dinding sel yang kompak dengan lapisan peptidoglikan sebanyak 30 lapis sehingga permeabilitasnya rendah. Bakteri Gram negatif mempunyai lapisan peptidoglikan yang tipis dan susunan dinding sel tidak kompak
sehingga
memiliki
permeabilitas
yang
cukup
tinggi.
Dengan
permeabilitas yang tinggi, maka zat aktif yang terdapat dalam ekstrak mudah menembus membran sel bakteri Gram negatif. Bakteri S. epidermidis merupakan golongan bakteri Gram positif. Poeloengan dkk. (2006) menyebutkan bahwa bakteri Gram positif mempunyai struktur
11
dinding sel tebal yang mengandung lipid, asam teikoat, dan peptidoglikan. Peptidoglikan merupakan komponen utama penyusun dinding sel bakteri. Bakteri Gram positif mempunyai dinding sel yang lebih tebal dibandingkan dengan Gram negatif sehingga bakteri Gram positif lebih resisten terhadap zat antibakteri dibandingkan dengan Gram negatif. Dari keterangan ini, maka dapat dikatakan bahwa S. epidermidis lebih resisten terhadap zat antibakteri karena mempunyai dinding sel yang lebih tebal. Ekstrak etanol buah adas pada penelitian ini adalah ekstrak yang telah disimpan selama 1 tahun sehingga kemungkinan besar komponen di dalam ekstrak yang mempunyai aktivitas antibakteri menjadi berkurang, terutama untuk senyawa yang mudah menguap. Chowdury dkk. (2009) menyebutkan bahwa di dalam buah adas mengandung anetol sebesar 58,5%. Anetol merupakan minyak atsiri dengan komponen penyusunnya adalah turunan fenil propanoid. Salah satu sifat minyak atsiri adalah tidak stabil terhadap pengaruh lingkungan, baik pengaruh oksigen udara, sinar matahari, dan panas (Gunawan dan Mulyani, 2004). Kaur dan Arora (2009) menyatakan bahwa ekstrak adas memiliki beberapa kandungan senyawa aktif seperti alkaloid sebesar 2,8% sampai 4,23%, flavonoid sebesar 8,58% sampai 15,06%, tanin sebesar 19,71% sampai 27,77%, saponin dan glikosida jantung sebesar 0,55% sampai 0,70%. Senyawa aktif di dalam ekstrak buah adas yang diduga berfungsi sebagai antibakteri adalah alkaloid, flavonoid, dan tanin. Cowan (1999) menyatakan bahwa senyawa alkaloid memiliki mekanisme penghambatan dengan cara mampu menembus dinding sel dan DNA bakteri sehingga merusak dinding sel dan menyebabkan kematian sel; flavonoid dapat membentuk ikatan kompleks dengan protein dan dinding sel bakteri sehingga struktur protein menjadi rusak serta dapat merusak membran sel bakteri; tanin mempunyai kemampuan berikatan dengan adesin bakteri, menghambat enzim dan selubung sel transpor protein, serta merusak membran sel bakteri, tanin juga mampu membentuk ikatan komplek dengan polisakarida.
12
KESIMPULAN Berdasarkan hasil penelitian maka dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol buah adas yang sudah disimpan selama 1 tahun memiliki aktivitas antibakteri terhadap Citrobacter diversus dengan zona hambat paling besar pada konsentrasi 1 mg/disc dengan diameter rata-rata sebesar 16 mm, sedangkan ekstrak etanol buah adas tidak memiliki aktivitas terhadap bakteri S. epidermidis dan S. sonnei ATCC 9290.
SARAN Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui senyawa-senyawa yang terkandung di dalam ekstrak etanol buah adas yang mempunyai aktivitas antibakteri.
DAFTAR PUSTAKA Anonim, 1993, Dasar-dasar Pemeriksaan Mikrobiologi, 18-19, Bagian Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran Universitas Gajah Mada, Yogyakarta. Anonim, 2006, Serial Tanaman Obat Adas, 6, 8, 9, Badan Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta. Anonima, 2008, ISO FARMAKOTERAPI, 742, PT. ISFI Penerbitan, Jakarta. Anonimb, 2008, Kumpulan Kuliah Farmakologi, 2nd ed., Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. Anonim, 2012, Antimicrobial Susceptibility Testing (Agar Disk Diffusion Method), (online), (http://www.cdc.gov/ncidod/dbmd/diseaseinfo/cholera/ch9.pdf, diakses tanggal 24 April 2012). Arvin, B. K., 2000, Ilmu Kesehatan Anak, Edisi 15, 974, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. Chowdury, J. U., Mobarok, H., Bhuiyan, N. I., and Nandi, N. C., 2009, Constituents of Essential Oils From Leaves And Seeds of Foeniculum vulgare Mill. Cultivated in Bangladesh, Bangladesh Journal Botani, 38 (2), 181-183.
13
Cowan, M. M., 1999, Plant Products as Antimicrobial Agents, Clinical Microbiology Reviews, 12 (4), 568-572. Gould, D. & Brooker, C., 2003, Mikrobiologi Terapan untuk Perawat, 252, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. Gulfraz, M., Mehmood, S., Minhas N., Jabeen, N., Kausar, R., Jabeen, K., & Arshad, G., 2008, Composition And Antimicrobial Properties of Essential Oil of Foenicullum vulgare, African Journal of Biotechnology, 7 (24), 4364, Departemen of Biochemistry, PMAS Arid Agriculture University, Rawalpindi, Pakistan. Husna, R., 2007, Pengaruh Pemberian Ekstrak Tumbuhan Meniran (Phyllanthus niruri L.) terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa, Skripsi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Malang. Jawetz, E., Melnick, J. L., & Adelberg, E. A., 2005, Mikrobiologi Kedokteran, diterjemahkan oleh Mudihardi, E., Kuntaman, Wasito, E. B., Mertaniasih, N. M., Harsono, S., Alimsardjono, L., Edisi XXII, 317-318, 322, 353, 362, Penerbit Salemba Medika, Jakarta. Kaur, G. J. & Arora, D. S., 2009, Antibacterial and Phytochemichal Screening of Anethum graveolens, Foeniculum vulgare and Trachyspermum amni, Research Article BMC Complementary and Alternative Medicine, (online), (http:www.biomedcentral.com.1472-6882/9/30, diakses tanggal 13 Juli 2011). Lay, B. W., 1994, Analisis Mikroba di Laboratorium, 72, PT. Raja Grafindo Persada, Jakarta. Maryati, Fauzia, R. S., & Rahayu, T., 2007, Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Daun Kemangi (Ocimum basilicum L.) terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli, Jurnal Penelitian Sains & Teknologi, 8 (1), 30-38. Poeloengan, M., Komala, I., Noor, S. M., Andriani, & Rianti, S. R. P., 2006, Aktivitas Air Perasan, Minyak Atsiri dan Ekstrak Etanol Daun Sirih terhadap Bakteri yang Diisolasi dari Sapi Mastitis Subklinis, Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner, 250-255. Pratiwi, T. S., 2008, Mikrobiologi Farmasi, 18, 188-191, Penerbit Erlangga, Jakarta. Purnami, N., 2012, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah Adas (Foeniculum vulgare Mill.) terhadap Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, dan
14
Staphylococcus saprophyticus, Skripsi, Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta. Radji, M., 2011, Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran, 107, 125, 127, 138-139, 184, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. Saeidi, M., Ebrahimzadeh. M. A., Morteza, S. K., & Rabiei, K. H., 2010, Evaluation of Antibacterial Effect of Ethanolic Extract of Foeniculum vulgare Mill, Journal of Mazandaran University of Medical Sciences, 20 (77), 88-91. Winarsih, S., Ratnawati, R., & Wulan, D. A., 2005, Efektivitas Ekstrak Adas Manis (Foeniculum vulgare Mill. var. dulce) Sebagai Antimikroba terhadap Methicilin Resistant Staphylococcus aureus, (online), (http://elib.ub.ac.id, diakses tanggal 13 Juli 2011).
15
